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liyixmu

金虫 (小有名气)

[求助] 求高手帮我看看DGGE图片,为什么跑不开,非常感谢

我做的海水中的细菌,我用40%和60%的胶。30v预电泳30分钟。110v,5个半小时。结果感觉条带都集中在胶的中部,没有分开。是因为胶浓度的原因吗?那该用多大 的胶浓度呢?还有以前跑DGGE,loading buffer都是跑出来2个不同颜色的带(绿色和蓝色)但是这次只有一条绿色的带。求各位高手帮忙,非常感谢!
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don'tworry,behappy!
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天鸟

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助。 2011-09-20 19:49:31
跑的时间不够了呀
你110伏电压差不多跑9-10小时吧
有人粗略的总结了个公式:电压乘上时间等于1000,首先你的时间肯定是没有跑够的了
快乐生活,我快乐
2楼2011-09-20 11:04:20
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木羊易

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


zhang8826857(金币+1): lz可以试试^_^ 2011-10-19 10:08:33
可以把胶浓度提高!比如10%,12%
3楼2011-09-20 12:58:26
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liyixmu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 天鸟 at 2011-09-20 11:04:20:
跑的时间不够了呀
你110伏电压差不多跑9-10小时吧
有人粗略的总结了个公式:电压乘上时间等于1000,首先你的时间肯定是没有跑够的了

恩,我也是觉得时间不够,不过就算时间再长点的话,估计还是跑不开。我觉得主要的问题是上面没有条带,还有条带分不开。你觉得胶浓度应该改变一下吗?谢谢
don'tworry,behappy!
4楼2011-09-20 13:20:28
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小嫩瓜

木虫 (小有名气)

我认为是胶浓度的问题!
活的艰辛是因为执着和不放弃
5楼2011-09-20 13:20:35
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liyixmu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 木羊易 at 2011-09-20 12:58:26:
可以把胶浓度提高!比如10%,12%

你的意思是提高10%吗?那就改成50%和70%怎么样呢?谢谢
don'tworry,behappy!
6楼2011-09-20 13:21:24
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liyixmu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 小嫩瓜 at 2011-09-20 13:20:35:
我认为是胶浓度的问题!

我也是这样觉得的,正在想胶浓度的问题,不知道改成多大比较合适,应该调大点吧?还有就是感觉条带挤在一起跑不开,是不是这些DNA序列差别不大呀。那高浓度和低浓度胶的差别该多大呢?谢谢
don'tworry,behappy!
7楼2011-09-20 13:23:16
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木羊易

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


liyixmu(金币+2): 2011-09-21 09:14:29
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流^_^ 2011-10-19 10:08:57
引用回帖:
6楼: Originally posted by liyixmu at 2011-09-20 13:21:24:
你的意思是提高10%吗?那就改成50%和70%怎么样呢?谢谢

我说的不是变性剂浓度,而是page的浓度!另外电泳时间长些,可200v,5h
8楼2011-09-20 18:50:44
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power5

金虫 (小有名气)


zhang8826857(金币+1): 鼓励交流^_^ 2011-10-19 10:09:08
这个可能有两方面的原因:一是跑的时间太短了,可以延长一些,例如80
v16h,110v10h。如果跑的时间延长了还是这样那样,就是变性梯度太宽了,可以调成45%~55%。不过40%~60%的变性梯度已经很窄了,是不是样品比较特殊?
9楼2011-09-21 09:34:34
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liyixmu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by power5 at 2011-09-21 09:34:34:
这个可能有两方面的原因:一是跑的时间太短了,可以延长一些,例如80
v16h,110v10h。如果跑的时间延长了还是这样那样,就是变性梯度太宽了,可以调成45%~55%。不过40%~60%的变性梯度已经很窄了,是不是样品比较 ...

谢谢,这是海水样品,按说不该这么少的条带的。我可能跑的有问题吧。我今天再试试45-55的。要是还不行,就再看看吧。
don'tworry,behappy!
10楼2011-09-21 12:53:34
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