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良缘百合

金虫 (正式写手)

[求助] 大家帮我看看我的DGGE图怎么了

最近DGGE条带一直是2-3条，我的样品是土壤，应该至少有一、二十条才对的，这到底是为什么啊？
求有经验的虫友帮忙分析一下啊，多谢多谢多谢……

DGGE前PCR，条带约230bp

下面是DGGE的一些条件、DGGE前PCR图片和DGGE图片：
8%gel，40%-60%的变性梯度，10%APS 80 ul、TEMED 16 ul；
25 ul样品和5 ul 6×loading buffer；
60摄氏度，75V 13h；
EB染色30min。
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爱家人爱学习爱生活
1楼 2011-05-26 17:40:30
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良缘百合

金虫 (正式写手)
顶一下

恳请虫友帮忙啊 谢谢
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爱家人爱学习爱生活
2楼2011-05-26 19:13:45
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良缘百合

金虫 (正式写手)
继续求助中……
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爱家人爱学习爱生活
3楼2011-05-27 23:07:40
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
良缘百合(金币+2): 2011-05-28 08:25:03
adslye(金币+1): 感谢交流~祝顺利！ 2011-08-16 16:35:39
电泳时间太长了吧。
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4楼2011-05-28 00:23:40
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良缘百合

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xiadongliang at 2011-05-28 00:23:40:
电泳时间太长了吧。

谢谢哦！
当时看文献，确定的时间和电压，好的，我调整下时间看看先
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爱家人爱学习爱生活
5楼2011-05-28 08:28:04
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怎么都行

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
良缘百合(金币+2): 2011-05-29 16:54:20
adslye(金币+2): 感谢交流~祝顺利！ 2011-08-16 16:35:57
silicare(BioEPI+1): 2011-09-21 14:00:08
LZ做的是细菌还是真菌？如果是真菌，目的带不多是正常的。
40%-60%的变性剂梯度是不是窄了点？
还有，不知你用的梯度灌胶器是伯乐那种“小车”还是连通器？如果是连通器的话应该让胶液流出速度不要太快，否则变性剂形不成浓度梯度。
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6楼2011-05-28 20:40:22
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良缘百合

金虫 (正式写手)
★ ★
adslye(金币+2): 上图就给分，鼓励认真！ 2011-08-16 16:36:42
引用回帖:
Originally posted by 怎么都行 at 2011-05-28 20:40:22:
LZ做的是细菌还是真菌？如果是真菌，目的带不多是正常的。
40%-60%的变性剂梯度是不是窄了点？
还有，不知你用的梯度灌胶器是伯乐那种“小车”还是连通器？如果是连通器的话应该让胶液流出速度不要太快，否则变 ...

谢谢哦，我做的是细菌多样性。
用的梯度灌胶器是连通器BIO-RAD的，下图就是，我减慢速度试试看啊
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爱家人爱学习爱生活
7楼2011-05-29 16:57:37
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
良缘百合(金币+2): 2011-05-30 12:02:24
adslye(金币+3): 很有启发！要常来哦！ 2011-08-16 16:37:22
应该是你的胶出问题了。
LS的图，那个梯度进样器，对着我们的那一面 有“this side for high density solution"的一面其实是要放”低梯度胶“，比如你的所谓40%的胶，而非60%。不要被这些文字迷惑了眼睛哦！！！
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8楼2011-05-29 19:46:11
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良缘百合

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 在雨中 at 2011-05-29 19:46:11:
应该是你的胶出问题了。
LS的图，那个梯度进样器，对着我们的那一面 有“this side for high density solution"的一面其实是要放”低梯度胶“，比如你的所谓40%的胶，而非60%。不要被这些文字迷惑了眼睛哦！ ...

谢谢 谢谢
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爱家人爱学习爱生活
9楼2011-05-30 12:03:34
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guolina1986

新虫 (初入文坛)
★
adslye(金币+1): 鼓励新虫交流~祝顺利！ 2011-08-16 16:37:43
楼主，我现在在提土壤里的DNA，用了各种方法都不行？我是直接采新鲜土样提取的，需不需要风干之类的前处理哦？
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10楼2011-05-31 10:10:37
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