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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 大家帮我看看我的DGGE图怎么了
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良缘百合

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by guolina1986 at 2011-05-31 10:10:37:
楼主，我现在在提土壤里的DNA，用了各种方法都不行？我是直接采新鲜土样提取的，需不需要风干之类的前处理哦？

要保鲜的，不能风干。
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爱家人爱学习爱生活
11楼2011-06-03 21:54:13
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cyunzhao

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
12楼2011-08-16 13:41:02
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cyunzhao

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
13楼2011-08-16 13:41:32
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huanggp2

新虫 (初入文坛)
我也要做这个了，好多都不会，希望你的问题能早点解决。
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14楼2011-08-17 11:39:16
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liyixmu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 在雨中 at 2011-05-29 19:46:11:
应该是你的胶出问题了。
LS的图，那个梯度进样器，对着我们的那一面 有“this side for high density solution"的一面其实是要放”低梯度胶“，比如你的所谓40%的胶，而非60%。不要被这些文字迷惑了眼睛哦！ ...

您好。我看论坛里你做DGGE经验比较丰富，想请教一些问题，希望能给我回复一下，谢谢！
我做的DGGE图，样品是细菌。胶浓度是40%-60%.最后条带大多集中在中部，上面和下面都没有。感觉条带很集中，我想让条带开一点，你觉得是应该高浓度和低浓度之间的范围该大点还是小点呢？
还有，预电泳的作用是什么呀？应该在上样前还是上样后预电泳呀？
非常感谢！希望您能给我回复，祝你实验顺利
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don'tworry，behappy！
15楼2011-09-20 13:46:26
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5): 感谢交流，欢迎常来生物版 2011-09-21 10:16:09
silicare(BioEPI+1): 2011-09-21 13:59:46
如果你的条带很集中。那么你就应该把你的电泳胶浓度再收窄一些，比如45-55%。这样你的条带就分开的更开一些，不过这个是不是太窄了？我对细菌电泳V3区，一般选择30-70%左右的梯度，样品条带比较多，最多50种条带。
预电泳有很多人的观点不同。很多朋友做DGGE刚开始30min，会高电压比如200V。然后设定个适合的低电压，直至电泳结束。
你可以贴出你的DGGE图给大家看看。
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16楼2011-09-21 09:13:51
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by liyixmu at 2011-09-20 13:46:26:
您好。我看论坛里你做DGGE经验比较丰富，想请教一些问题，希望能给我回复一下，谢谢！
我做的DGGE图，样品是细菌。胶浓度是40%-60%.最后条带大多集中在中部，上面和下面都没有。感觉条带很集中，我想让条带开一 ...

如果你的条带很集中。那么你就应该把你的电泳胶浓度再收窄一些，比如45-55%。这样你的条带就分开的更开一些，不过这个是不是太窄了？我对细菌电泳V3区，一般选择30-70%左右的梯度，样品条带比较多，最多50种条带。
预电泳有很多人的观点不同。很多朋友做DGGE刚开始30min，会高电压比如200V。然后设定个适合的低电压，直至电泳结束。
你可以贴出你的DGGE图给大家看看。
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17楼2011-09-21 09:14:17
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liyixmu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 在雨中 at 2011-09-21 09:14:17:
如果你的条带很集中。那么你就应该把你的电泳胶浓度再收窄一些，比如45-55%。这样你的条带就分开的更开一些，不过这个是不是太窄了？我对细菌电泳V3区，一般选择30-70%左右的梯度，样品条带比较多，最多50种条带 ...

非常感谢！不过我也不知道怎么回事，我又试了个50-70%的胶浓度。还是没跑开。我觉得把胶范围收窄点试试吧，就像你说的45-55%。还有预电泳是在上样前，对胶进行电泳吗？我们实验室大多数都是上完样再进行预电泳，我也不知道到底哪个更好？谢谢了
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don'tworry，behappy！
18楼2011-09-21 10:00:29
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
18楼: Originally posted by liyixmu at 2011-09-21 10:00:29:
非常感谢！不过我也不知道怎么回事，我又试了个50-70%的胶浓度。还是没跑开。我觉得把胶范围收窄点试试吧，就像你说的45-55%。还有预电泳是在上样前，对胶进行电泳吗？我们实验室大多数都是上完样再进行预电泳， ...

我们实验室都是上完样再进行预电泳的。不要管预电泳了。
强烈建议你把DGGE图贴出来看看。如果担心图片被盗用，可以剪图一小部分呀。哈哈。祝你实验成功！
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19楼2011-09-21 13:40:06
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liyixmu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 在雨中 at 2011-09-21 13:40:06:
我们实验室都是上完样再进行预电泳的。不要管预电泳了。
强烈建议你把DGGE图贴出来看看。如果担心图片被盗用，可以剪图一小部分呀。哈哈。祝你实验成功！

嘿嘿，不是担心盗图，怎么会呢？我自己写了个帖子把图写贴出来了，我再贴一下吧呵呵。我又试了50-70.还是不行，我今天再试试45-55的吧。到时候再让你看看图。看看能不能跑开，谢谢了。
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don'tworry，behappy！
20楼2011-09-21 14:10:15
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