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良缘百合

金虫 (正式写手)

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[求助] 大家帮我看看我的DGGE图怎么了

最近DGGE条带一直是2-3条，我的样品是土壤，应该至少有一、二十条才对的，这到底是为什么啊？
求有经验的虫友帮忙分析一下啊，多谢多谢多谢……

DGGE前PCR，条带约230bp

下面是DGGE的一些条件、DGGE前PCR图片和DGGE图片：
8%gel，40%-60%的变性梯度，10%APS 80 ul、TEMED 16 ul；
25 ul样品和5 ul 6×loading buffer；
60摄氏度，75V 13h；
EB染色30min。

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爱家人爱学习爱生活

1楼 2011-05-26 17:40:30

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在雨中

金虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5): 感谢交流，欢迎常来生物版 2011-09-21 10:16:09
silicare(BioEPI+1): 2011-09-21 13:59:46

如果你的条带很集中。那么你就应该把你的电泳胶浓度再收窄一些，比如45-55%。这样你的条带就分开的更开一些，不过这个是不是太窄了？我对细菌电泳V3区，一般选择30-70%左右的梯度，样品条带比较多，最多50种条带。
预电泳有很多人的观点不同。很多朋友做DGGE刚开始30min，会高电压比如200V。然后设定个适合的低电压，直至电泳结束。
你可以贴出你的DGGE图给大家看看。