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良缘百合

金虫 (正式写手)

[求助] 大家帮我看看我的DGGE图怎么了

最近DGGE条带一直是2-3条,我的样品是土壤,应该至少有一、二十条才对的,这到底是为什么啊?
求有经验的虫友帮忙分析一下啊,多谢多谢多谢……

DGGE前PCR,条带约230bp

下面是DGGE的一些条件、DGGE前PCR图片和DGGE图片:
8%gel,40%-60%的变性梯度,10%APS 80 ul、TEMED 16 ul;
25 ul样品和5 ul 6×loading buffer;
60摄氏度,75V 13h;
EB染色30min。


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liyixmu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 在雨中 at 2011-09-21 09:14:17:
如果你的条带很集中。那么你就应该把你的电泳胶浓度再收窄一些,比如45-55%。这样你的条带就分开的更开一些,不过这个是不是太窄了?我对细菌电泳V3区,一般选择30-70%左右的梯度,样品条带比较多,最多50种条带 ...

非常感谢!不过我也不知道怎么回事,我又试了个50-70%的胶浓度。还是没跑开。我觉得把胶范围收窄点试试吧,就像你说的45-55%。还有预电泳是在上样前,对胶进行电泳吗?我们实验室大多数都是上完样再进行预电泳,我也不知道到底哪个更好?谢谢了
don'tworry,behappy!
18楼2011-09-21 10:00:29
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良缘百合

金虫 (正式写手)

顶一下

恳请虫友帮忙啊 谢谢
爱家人爱学习爱生活
2楼2011-05-26 19:13:45
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良缘百合

金虫 (正式写手)

继续求助中……
爱家人爱学习爱生活
3楼2011-05-27 23:07:40
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


良缘百合(金币+2): 2011-05-28 08:25:03
adslye(金币+1): 感谢交流~祝顺利! 2011-08-16 16:35:39
电泳时间太长了吧。
4楼2011-05-28 00:23:40
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