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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求高手帮我看看DGGE图片，为什么跑不开，非常感谢
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liyixmu

金虫 (小有名气)

[求助] 求高手帮我看看DGGE图片，为什么跑不开，非常感谢

我做的海水中的细菌，我用40%和60%的胶。30v预电泳30分钟。110v，5个半小时。结果感觉条带都集中在胶的中部，没有分开。是因为胶浓度的原因吗？那该用多大 的胶浓度呢？还有以前跑DGGE，loading buffer都是跑出来2个不同颜色的带（绿色和蓝色）但是这次只有一条绿色的带。求各位高手帮忙，非常感谢！
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don'tworry，behappy！
1楼 2011-09-20 09:31:51
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天鸟

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助。 2011-09-20 19:49:31
跑的时间不够了呀
你110伏电压差不多跑9-10小时吧
有人粗略的总结了个公式：电压乘上时间等于1000，首先你的时间肯定是没有跑够的了
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快乐生活，我快乐
2楼2011-09-20 11:04:20
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木羊易

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): lz可以试试^_^ 2011-10-19 10:08:33
可以把胶浓度提高！比如10%，12%
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3楼2011-09-20 12:58:26
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liyixmu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 天鸟 at 2011-09-20 11:04:20:
跑的时间不够了呀
你110伏电压差不多跑9-10小时吧
有人粗略的总结了个公式：电压乘上时间等于1000，首先你的时间肯定是没有跑够的了

恩，我也是觉得时间不够，不过就算时间再长点的话，估计还是跑不开。我觉得主要的问题是上面没有条带，还有条带分不开。你觉得胶浓度应该改变一下吗？谢谢
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don'tworry，behappy！
4楼2011-09-20 13:20:28
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小嫩瓜

木虫 (小有名气)
我认为是胶浓度的问题！
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活的艰辛是因为执着和不放弃
5楼2011-09-20 13:20:35
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liyixmu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 木羊易 at 2011-09-20 12:58:26:
可以把胶浓度提高！比如10%，12%

你的意思是提高10%吗？那就改成50%和70%怎么样呢？谢谢
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don'tworry，behappy！
6楼2011-09-20 13:21:24
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liyixmu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小嫩瓜 at 2011-09-20 13:20:35:
我认为是胶浓度的问题！

我也是这样觉得的，正在想胶浓度的问题，不知道改成多大比较合适，应该调大点吧？还有就是感觉条带挤在一起跑不开，是不是这些DNA序列差别不大呀。那高浓度和低浓度胶的差别该多大呢？谢谢
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don'tworry，behappy！
7楼2011-09-20 13:23:16
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木羊易

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
liyixmu(金币+2): 2011-09-21 09:14:29
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流^_^ 2011-10-19 10:08:57
引用回帖:
6楼: Originally posted by liyixmu at 2011-09-20 13:21:24:
你的意思是提高10%吗？那就改成50%和70%怎么样呢？谢谢

我说的不是变性剂浓度，而是page的浓度！另外电泳时间长些，可200v，5h
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8楼2011-09-20 18:50:44
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power5

金虫 (小有名气)
★
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流^_^ 2011-10-19 10:09:08
这个可能有两方面的原因：一是跑的时间太短了，可以延长一些，例如80
v16h，110v10h。如果跑的时间延长了还是这样那样，就是变性梯度太宽了，可以调成45%~55%。不过40%~60%的变性梯度已经很窄了，是不是样品比较特殊？
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9楼2011-09-21 09:34:34
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liyixmu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by power5 at 2011-09-21 09:34:34:
这个可能有两方面的原因：一是跑的时间太短了，可以延长一些，例如80
v16h，110v10h。如果跑的时间延长了还是这样那样，就是变性梯度太宽了，可以调成45%~55%。不过40%~60%的变性梯度已经很窄了，是不是样品比较 ...

谢谢，这是海水样品，按说不该这么少的条带的。我可能跑的有问题吧。我今天再试试45-55的。要是还不行，就再看看吧。
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don'tworry，behappy！
10楼2011-09-21 12:53:34
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