应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 自己做的PFU高保真酶PCR，胶图如下，没有目的条带？
181/1返回列表
查看: 2808  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

[交流] 自己做的PFU高保真酶PCR，胶图如下，没有目的条带？

左边的MAKER最大是两2000，紧挨着的条带是P出来的，按MAKER比才100多，模板是1200左右的，那这些条带是什么啊？我只加了0.5ul的引物，二聚的话不会这么大吧。。。。。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

PCR技术

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-09-10 17:41:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxd95

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
加大模板量，做梯度PCR试试！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-09-10 22:55:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-09-12 08:15:00
引用回帖:
1楼: Originally posted by loveskyzhou at 2011-09-10 17:41:30:
左边的MAKER最大是两2000，紧挨着的条带是P出来的，按MAKER比才100多，模板是1200左右的，那这些条带是什么啊？我只加了0.5ul的引物，二聚的话不会这么大吧。。。。。
[eimg]a1/ae/1346820_1315647487_273.jpg[/e ...

目的条带多大？
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3571297&fpage=1 的4楼！
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-09-11 08:07:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-11 08:07:07:
目的条带多大？
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3571297&fpage=1 的4楼！

1200左右
回复此楼
4楼2011-09-11 09:29:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zxd95 at 2011-09-10 22:55:31:
加大模板量，做梯度PCR试试！

那些条带是什么呢？？
赞一下 回复此楼
5楼2011-09-11 09:31:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
loveskyzhou(金币+2): 2011-09-11 09:56:51
引用回帖:
5楼: Originally posted by loveskyzhou at 2011-09-11 09:31:51:
那些条带是什么呢？？

短非特异性扩增产物。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-09-11 09:39:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-11 09:39:27:
短非特异性扩增产物。

非特异性？？？！！那么亮而且整齐啊
赞一下 回复此楼
7楼2011-09-11 09:57:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-09-12 08:15:18
引用回帖:
7楼: Originally posted by loveskyzhou at 2011-09-11 09:57:24:
非特异性？？？！！那么亮而且整齐啊

是的，我以前扩2K的片段，一开始只能扩到500bp，后重新提基因组DNA，重新摸索扩。只要引物设计基本不差，一般优化优化都可以的。
见 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3571297&fpage=1
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2011-09-11 10:07:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xt123xt

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+1): 分析一下原因？ 2011-09-12 08:15:33
marker就3条？ 感觉像没跑开
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2011-09-11 10:36:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xt123xt

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励上图 2011-09-14 22:14:56
我没见过只有3个条带的marker 也没见过3个条带都这么偏上的跑胶 如果是短片段的话 会跑的比较下（100V 40min DL2000 第六条100bp 见图） 会不会是时间不够 或者marker不好 比如放久了 降解了 后面的条带就看不到了
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2011-09-12 12:33:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xt123xt at 2011-09-12 12:33:04:
我没见过只有3个条带的marker 也没见过3个条带都这么偏上的跑胶 如果是短片段的话 会跑的比较下（100V 40min DL2000 第六条100bp 见图） 会不会是时间不够 或者marker不好 比如放久了 降解了 后面的条带就看不到了 ...

呵呵，跑的时间是短点，拍的不清楚吧 不是3条带的M。。。。。M应该没问题，所以我也觉得是P不成目的片段，只能P到那么多了。。。。
赞一下 回复此楼
11楼2011-09-12 14:55:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xt123xt

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
那就可能是引物的问题 是用软件设计的么? prime3?
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-09-12 15:20:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by xt123xt at 2011-09-12 15:20:30:
那就可能是引物的问题 是用软件设计的么? prime3?

5....引物没问题 之前P出来过，可能是PFU高保真本来就不好P 吧
赞一下 回复此楼
13楼2011-09-12 17:01:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianliangtao

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
loveskyzhou(金币+1): 谢谢，看了PROTOCOL 确实是 我再试试 2011-09-13 14:13:05
wanhscn(金币+5): 鼓励新虫多发帖多回帖! 2011-09-13 15:33:42
wanhscn:编辑内容 2011-09-13 15:34
同学，PFU速度很慢的，你延伸时间设置没有问题吧？一分钟500bp以内

[ Last edited by wanhscn on 2011-9-13 at 15:34 ]
赞一下(2人) 回复此楼
14楼2011-09-13 10:54:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guojianping

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
退火温度也优化下吧，有时候温度低回P出来很亮的杂带。。。
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2011-09-14 09:38:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

redgrape123

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
建议你变性时间长一些，模板多加一些，退火温度向下降一点~
赞一下(1人) 回复此楼
16楼2011-09-14 11:48:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 道理是没错啊，呵呵 2011-09-14 22:15:41
看来楼主是个做实验马马虎虎的人，跑个核酸电泳Marker都能跑成这个鬼样子，只能告诉你一个经验：你糊弄实验，它也糊弄你呀！！
赞一下(2人) 回复此楼
17楼2011-09-14 21:49:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yejian

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
模板降到0.2ul，重新设计下引物，做个梯度PCR，应该没问题的
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2011-09-19 18:39:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 loveskyzhou 的主题更新
181/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +11 Ymlll 2026-03-18 14/700 2026-03-20 10:46 by EBSD
[考研] 求调剂 +3 暗涌afhb 2026-03-16 3/150 2026-03-20 00:28 by 河南大学校友
[考研] 307求调剂 +9 冷笙123 2026-03-17 9/450 2026-03-19 22:44 by 学员8dgXkO
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +14 陌の森林 2026-03-18 14/700 2026-03-19 22:38 by 学员8dgXkO
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 10/500 2026-03-19 16:05 by 余麟余
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 346求调剂[0856] +3 WayneLim327 2026-03-16 6/300 2026-03-19 11:21 by WayneLim327
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 321求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭