| 查看: 7673 | 回复: 20 | ||||
[交流]
【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？
|
我做的是线粒体16s ，长度大约为600bp，但是PCR后没有目的条带，只有230bp左右的条带，附有图片，请哪位高手指导一下，非常感谢！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 核酸生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有129人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
-
透明质酸酶的作用机制：如何实现药物递送
已经有0人回复
-
爱思维尔旗下LWT投稿
已经有9人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR目的条带没跑出，但是跑出了特异性很强的单一条带，是什么原因呢？
已经有9人回复
- PCR一直扩不出目的条带
已经有10人回复
- 自己做的PFU高保真酶PCR，胶图如下，没有目的条带？
已经有17人回复
- 连接后转化子PCR出现非特异性的条带
已经有10人回复
- 连接转化后菌落PCR验证出现非特异性扩增
已经有5人回复
- 重组PCR验证时没有目的条带
已经有3人回复
- RT后扩增到的条带出现非特异性，该如何处理
已经有4人回复
- PCR后电泳，有目的条带，也有非特异性条带，可以切胶纯化进行下一步实验吗？
已经有2人回复
- 【求助/交流】菌液PCR鉴定阳性克隆时，总出现非特异性条带
已经有8人回复
- 【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带
已经有7人回复
- 【求助/交流】PCR扩增后没有条带是怎么回事?
已经有5人回复
- 【求助/交流】请教Western blot出现非特异性条带的怎么解决
已经有8人回复
- 【求助/交流】关于western杂交非特异性条带的问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】RT-PCR总是得不到目的条带
已经有12人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
上海嘉定周边俩小时车程
+5/170
-
国自然申报交流祈福
+4/126
-
坐标广州，征女友
+2/124
-
河南师范大学水产学院博士招生
+1/83
-
招聘科研助理
+1/80
-
太行山徒步之凌水河（二）
+1/74
-
生命学部的面地青本子开始分发了么？
+1/61
-
山东中医药大学2026年招聘有机化学、药物化学等相关方向师资博士后
+1/44
-
松山湖材料实验室-大连理工大学联合招收博士研究生
+1/35
-
北京邮电大学电子科学与技术招收博士
+1/29
-
申请账号解封
+1/10
-
又是一年基金申报，焦虑，某些学术大佬能不能少点干预
+1/8
-
英国大学招收电子散热及数字孪生研究方向的博士生
+1/8
-
Smart Construction期刊 Scopus收录，长期征收高质量稿件
+1/7
-
【硕士生补录】澳科大诚招2026年秋季药剂学硕士研究生1-2名
+1/5
-
注册小木虫周年大礼包领取不了
+1/5
-
招收2026年秋季入学博士生1名（河北工业大学/北京科技大学联合 增材制造/生物材料）
+1/3
-
招收2026年秋季入学博士生1名（河北工业大学/北京科技大学联合 增材制造/生物材料）
+1/3
-
英国伦敦布鲁内尔大学高薪招聘欧盟玛丽居里全奖博士
+1/3
-
爱思维尔旗下LWT投稿
+1/2
brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
- MolEPI: 14
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 1.2
- 金币: 113277
- 帖子: 28956
- 在线: 3704.4小时
- 虫号: 464575
★ ★
wazlf(金币+1): 2011-02-27 15:28:55
dhd997(金币+2): 对了 2011-02-28 10:46:11
wazlf(金币+1): 2011-02-27 15:28:55
dhd997(金币+2): 对了 2011-02-28 10:46:11
|
兄弟，以后有PCR的问题请在下面这个帖子里面问哈。 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2897252&fpage=1 |
2楼2011-02-27 13:49:42
brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
- MolEPI: 14
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 1.2
- 金币: 113277
- 帖子: 28956
- 在线: 3704.4小时
- 虫号: 464575
3楼2011-02-27 13:56:17
brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
- MolEPI: 14
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 1.2
- 金币: 113277
- 帖子: 28956
- 在线: 3704.4小时
- 虫号: 464575
，不好意思，楼主貌似是位MM，这个头像。。。。。。火影看多了。。 4楼2011-02-27 14:04:15
5楼2011-02-27 15:39:16
6楼2011-02-27 15:44:31
brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
- MolEPI: 14
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 1.2
- 金币: 113277
- 帖子: 28956
- 在线: 3704.4小时
- 虫号: 464575
★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+5): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-27 16:32:41
wazlf(金币+5): 谢谢你了！ 2011-02-28 13:09:42
rainwander(金币+5): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-27 16:32:41
wazlf(金币+5): 谢谢你了！ 2011-02-28 13:09:42
|
呵呵，非特异的好一致呀，我还以为是引物二聚体呢。 你做真核线粒体的16S，这个我没有做过，不知道在不同物种之间的保守性有没 有细菌那么高。你引物来源的那篇文献和你做的是一个物种的么？ 如果那个是非特异性扩增，那么亮的话，说明你的引物还是没有设计好，我看你 的退火温度才51度，可以再延长引物以提高退火温度。这个我觉得是最快速的方 法了。 另外不知道你设计的引物的理论Tm是多少，可不可以在51度的基础上再拉高几 度呢？比如到55、58的样子。 还有就是可以做一个touchdown PCR看看结果会不会有改善。 上面这两个可以先做，没提高的话就别优化什么了，重新设计引物。 |
7楼2011-02-27 15:55:16
★ ★
wazlf(金币+3): 2011-03-01 20:21:34
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-03-06 15:06:07
wazlf(金币+3): 2011-03-01 20:21:34
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-03-06 15:06:07
|
那个我测过，不过是1.3KB左右的长度。 同意7楼的。。。我再帮忙整理下： （遇到这种情况一般先调整温度，再调整体系，再重新设计引物） 1、可以先用梯度PCR做不同退火温度。51确实低。可以每提高3度，一起做。 2、可以用TOUCHDOWN,理由是提高特异性 或者TOUCHUP，理由是你的模板质量差 3、增加模板用量，再另外加些MG2+，有条件的话可以加一些Q BUFFER或DMSO。。不过你才扩600多的，估计用不着，但是可以试试DMSO，便宜。 4、重新设计或合成引物 |
8楼2011-03-01 11:38:19
9楼2011-03-06 10:13:42
10楼2011-03-06 12:34:15
11楼2011-03-08 15:30:11
12楼2011-03-09 11:39:54
13楼2011-03-09 13:32:18
14楼2011-03-16 22:48:29
15楼2011-03-19 10:25:39
16楼2011-03-19 10:43:23
17楼2011-03-24 11:03:05
18楼2011-03-26 08:20:19
19楼2011-03-26 23:27:32
20楼2012-08-18 20:28:21
21楼2013-09-11 09:35:43