24小时热门版块排行榜    

查看: 2938  |  回复: 8

dljgzm

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】菌液PCR鉴定阳性克隆时,总出现非特异性条带 已有8人参与

在构建细菌克隆文库中,做菌液PCR 鉴定时,总有非特异性条带,退火温度以提到58度,总体积30,模板加了0.4微升,还是有非特异性条带,怎么办啊?可以继续做酶切吗?测序吗
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skkyy88888

铜虫 (著名写手)

那有没有目的条带啊?没有的话就不用做酶切了,有的话可以做做。
2楼2010-12-10 14:24:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dljgzm

铜虫 (初入文坛)

菌液PCR鉴定阳性克隆时,总出现非特异性条带

我有目的条带,也有非特异性条带,我一直担心酶切分型的效果不好,此外,这样的PCR产物送去测序,测得结果可信不?
3楼2010-12-10 16:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuyueyunbin

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
要是非特异的比目的弱的多,可以测出来的。我们也遇到过这种状况,总有两条带
4楼2010-12-15 21:13:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

退火温度提到60度,可以P出来的。
生命不息,探索不止。
5楼2010-12-15 22:45:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adslye

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果相信人品,可以提质粒再P。我昨天就是菌落三条带,觉得不可能。于是提质粒,酶切,顺便也拿质粒做了个PCR。结果很好,一条带。
6楼2010-12-16 09:30:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haitian0625

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
那是不是你的模板浓度偏高呢,算一下是多少ng/ul吧。
7楼2010-12-16 10:16:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
建议用kit抽提质粒,再试一下PCR。
8楼2010-12-16 10:33:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liaotiantian

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
提质粒做PCR吧,如果是菌液PCR,有时候杂质太多了会有影响。
自己酶切检测一下再送样测序
9楼2011-12-14 16:14:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dljgzm 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工求调剂 +4 为学666 2026-03-16 4/200 2026-03-17 14:28 by houyaoxu
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +3 慕寒mio 2026-03-16 3/150 2026-03-17 13:46 by houyaoxu
[考研] 332求调剂 +5 Zz版 2026-03-13 5/250 2026-03-17 11:01 by JineShine
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 321求调剂(食品/专硕) +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
信息提示
请填处理意见