应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】菌液PCR鉴定阳性克隆时，总出现非特异性条带
91/1返回列表
查看: 3335  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dljgzm

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】菌液PCR鉴定阳性克隆时，总出现非特异性条带 已有8人参与

在构建细菌克隆文库中，做菌液PCR 鉴定时，总有非特异性条带，退火温度以提到58度，总体积30，模板加了0.4微升，还是有非特异性条带，怎么办啊？可以继续做酶切吗？测序吗
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-12-10 14:21:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skkyy88888

铜虫 (著名写手)
那有没有目的条带啊？没有的话就不用做酶切了，有的话可以做做。
赞一下 回复此楼
2楼2010-12-10 14:24:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dljgzm

铜虫 (初入文坛)

菌液PCR鉴定阳性克隆时，总出现非特异性条带

我有目的条带，也有非特异性条带，我一直担心酶切分型的效果不好，此外，这样的PCR产物送去测序，测得结果可信不？
赞一下 回复此楼
3楼2010-12-10 16:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuyueyunbin

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
要是非特异的比目的弱的多，可以测出来的。我们也遇到过这种状况，总有两条带
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-12-15 21:13:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)
退火温度提到60度，可以P出来的。
赞一下 回复此楼
生命不息，探索不止。
5楼2010-12-15 22:45:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adslye

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果相信人品，可以提质粒再P。我昨天就是菌落三条带，觉得不可能。于是提质粒，酶切，顺便也拿质粒做了个PCR。结果很好，一条带。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-12-16 09:30:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haitian0625

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
那是不是你的模板浓度偏高呢，算一下是多少ng/ul吧。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-12-16 10:16:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议用kit抽提质粒，再试一下PCR。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-12-16 10:33:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liaotiantian

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
提质粒做PCR吧，如果是菌液ＰＣＲ，有时候杂质太多了会有影响。
自己酶切检测一下再送样测序
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-12-14 16:14:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dljgzm 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:00 by mibUvS8DDCwf
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:21 by mibUvS8DDCwf
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:12 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 23:45 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-14 22:24 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:12 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:01 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:48 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:37 by Aj1rhIDL5ixY
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 15:09 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭