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dljgzm

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】菌液PCR鉴定阳性克隆时,总出现非特异性条带 已有8人参与

在构建细菌克隆文库中,做菌液PCR 鉴定时,总有非特异性条带,退火温度以提到58度,总体积30,模板加了0.4微升,还是有非特异性条带,怎么办啊?可以继续做酶切吗?测序吗
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

那有没有目的条带啊?没有的话就不用做酶切了,有的话可以做做。
2楼2010-12-10 14:24:28
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dljgzm

铜虫 (初入文坛)

菌液PCR鉴定阳性克隆时,总出现非特异性条带

我有目的条带,也有非特异性条带,我一直担心酶切分型的效果不好,此外,这样的PCR产物送去测序,测得结果可信不?
3楼2010-12-10 16:11:01
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wuyueyunbin

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
要是非特异的比目的弱的多,可以测出来的。我们也遇到过这种状况,总有两条带
4楼2010-12-15 21:13:54
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

退火温度提到60度,可以P出来的。
生命不息,探索不止。
5楼2010-12-15 22:45:10
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adslye

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果相信人品,可以提质粒再P。我昨天就是菌落三条带,觉得不可能。于是提质粒,酶切,顺便也拿质粒做了个PCR。结果很好,一条带。
6楼2010-12-16 09:30:36
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haitian0625

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
那是不是你的模板浓度偏高呢,算一下是多少ng/ul吧。
7楼2010-12-16 10:16:12
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scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
建议用kit抽提质粒,再试一下PCR。
8楼2010-12-16 10:33:50
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liaotiantian

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
提质粒做PCR吧,如果是菌液PCR,有时候杂质太多了会有影响。
自己酶切检测一下再送样测序
9楼2011-12-14 16:14:29
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