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dljgzm

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】菌液PCR鉴定阳性克隆时,总出现非特异性条带 已有8人参与

在构建细菌克隆文库中,做菌液PCR 鉴定时,总有非特异性条带,退火温度以提到58度,总体积30,模板加了0.4微升,还是有非特异性条带,怎么办啊?可以继续做酶切吗?测序吗
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haitian0625

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
那是不是你的模板浓度偏高呢,算一下是多少ng/ul吧。
7楼2010-12-16 10:16:12
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

那有没有目的条带啊?没有的话就不用做酶切了,有的话可以做做。
2楼2010-12-10 14:24:28
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dljgzm

铜虫 (初入文坛)

菌液PCR鉴定阳性克隆时,总出现非特异性条带

我有目的条带,也有非特异性条带,我一直担心酶切分型的效果不好,此外,这样的PCR产物送去测序,测得结果可信不?
3楼2010-12-10 16:11:01
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wuyueyunbin

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
要是非特异的比目的弱的多,可以测出来的。我们也遇到过这种状况,总有两条带
4楼2010-12-15 21:13:54
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