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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】菌液PCR鉴定阳性克隆时，总出现非特异性条带
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dljgzm

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】菌液PCR鉴定阳性克隆时，总出现非特异性条带 已有8人参与

在构建细菌克隆文库中，做菌液PCR 鉴定时，总有非特异性条带，退火温度以提到58度，总体积30，模板加了0.4微升，还是有非特异性条带，怎么办啊？可以继续做酶切吗？测序吗
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1楼 2010-12-10 14:21:26
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
那有没有目的条带啊？没有的话就不用做酶切了，有的话可以做做。
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2楼2010-12-10 14:24:28
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dljgzm

铜虫 (初入文坛)

菌液PCR鉴定阳性克隆时，总出现非特异性条带

我有目的条带，也有非特异性条带，我一直担心酶切分型的效果不好，此外，这样的PCR产物送去测序，测得结果可信不？
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3楼2010-12-10 16:11:01
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wuyueyunbin

金虫 (小有名气)
★
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要是非特异的比目的弱的多，可以测出来的。我们也遇到过这种状况，总有两条带
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4楼2010-12-15 21:13:54
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)
退火温度提到60度，可以P出来的。
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生命不息，探索不止。
5楼2010-12-15 22:45:10
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adslye

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果相信人品，可以提质粒再P。我昨天就是菌落三条带，觉得不可能。于是提质粒，酶切，顺便也拿质粒做了个PCR。结果很好，一条带。
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6楼2010-12-16 09:30:36
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haitian0625

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
那是不是你的模板浓度偏高呢，算一下是多少ng/ul吧。
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7楼2010-12-16 10:16:12
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scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议用kit抽提质粒，再试一下PCR。
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8楼2010-12-16 10:33:50
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liaotiantian

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
提质粒做PCR吧，如果是菌液ＰＣＲ，有时候杂质太多了会有影响。
自己酶切检测一下再送样测序
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9楼2011-12-14 16:14:29
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