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wazlf

银虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1672.4
帖子: 354
在线: 182.9小时
虫号: 1155591

[交流] 【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？

我做的是线粒体16s ，长度大约为600bp，但是PCR后没有目的条带，只有230bp左右的条带，附有图片，请哪位高手指导一下，非常感谢！

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1楼 2011-02-27 13:47:57

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花瓣雨_ice

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 4653.6
帖子: 140
在线: 37.6小时
虫号: 1217233

wazlf(金币+1): 2011-03-08 15:29:23

引用回帖:

Originally posted by wazlf at 2011-02-27 15:44:31:
反应体系是50μL：mix25μL，水23μL，引物各0.5μL，模板1μL.那个是非特异性条带。怎样做改进，才能的到想要的条带？还有这事哪些方面的问题？

我感觉你的反应体系适当改变下，我做 PCR 20ul的反应体系都放1ul的引物的，是不是你的引物量少的缘故啊。

9楼2011-03-06 10:13:42

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

★ ★
wazlf(金币+1): 2011-02-27 15:28:55
dhd997(金币+2): 对了 2011-02-28 10:46:11

引用回帖:

Originally posted by wazlf at 2011-02-27 13:47:57:
我做的是线粒体16s ，长度大约为600bp，但是PCR后没有目的条带，只有230bp左右的条带，附有图片，请哪位高手指导一下，非常感谢！

兄弟，以后有PCR的问题请在下面这个帖子里面问哈。

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2897252&fpage=1

赞一下(1人)

2楼2011-02-27 13:49:42

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流。 2011-02-27 14:07:04

引用回帖:

Originally posted by wazlf at 2011-02-27 13:47:57:
我做的是线粒体16s ，长度大约为600bp，但是PCR后没有目的条带，只有230bp左右的条带，附有图片，请哪位高手指导一下，非常感谢！

你指的230bp左右的条带是最左边的那个么？

觉得特异性好差啊，用的是通用引物还是你自己设计的呢？

PCR反应体系，条件也列一下吧。

中间那么多亮带是不是引物二聚体呢？

赞一下(1人)

3楼2011-02-27 13:56:17

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

，不好意思，楼主貌似是位MM，这个头像。。。。。。火影看多了。。

4楼2011-02-27 14:04:15

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