| 查看: 1372 | 回复: 3 | |||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
lemonilove银虫 (小有名气)
|
[求助]
重组PCR验证时没有目的条带
|
||
|
进行基因A和基因B进行重组PCR后，琼脂糖核酸电泳发现存在目的条带，但是也有很多非特异性的条带，切胶回收后用距离最远的两端的引物PCR验证，核酸电泳后只在100-250bp之间有很亮的条带，而目标位置没有条带，求解决办法! A基因  B基因  重组PCR验证  [ Last edited by lemonilove on 2011-7-26 at 21:59 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有67人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 链霉菌基因敲除怪现象
已经有32人回复
- 毕赤酵母表达的蛋白无活性
已经有8人回复
- 求助：关于重组质粒目的条带丢失
已经有9人回复
- 求PCR解！谢谢！
已经有13人回复
- 酶连之后如何检测？
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于酶切
已经有31人回复
anlewo7777
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 1786.8
- 散金: 7
- 红花: 3
- 帖子: 341
- 在线: 108.3小时
- 虫号: 314883
- 注册: 2007-02-25
- 性别: GG
- 专业: 微生物
2楼2011-07-26 22:06:33
空谷幽风
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 32
- 应助: 13 (小学生)
- 贵宾: 0.05
- 金币: 1106.1
- 散金: 500
- 红花: 13
- 帖子: 615
- 在线: 116.5小时
- 虫号: 714271
- 注册: 2009-03-04
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★
西瓜(金币+3, MolEPI+1): 重组PCR是做出来了，但是再扩增就没有了呢。降低退火温度和换方法都可以考虑。 2011-07-26 22:50:09
西瓜(金币+3, MolEPI+1): 重组PCR是做出来了，但是再扩增就没有了呢。降低退火温度和换方法都可以考虑。 2011-07-26 22:50:09
|
你的B基因扩完后有两条非常量的带，不知道你的A,B基因以及B图中扩出来的片段各是多大？至于重组PCR没扩出目的条带给你的建议是： （1）检查overlap有多长，最好在15bp以上，能达到20bp就更好了 （2）选取你扩A,B基因时最低的那个退火温度来扩增 （3）如果两个方案都不行设计酶切连接方案，在A片段的3‘末端和B片段的5’端（以A在前B在后为例）添加BbsI酶切位点（先看看这个酶怎么用，看懂了再设计，实在看不懂问我），先将两个片段分别连载体，测序正确后再将A装B或B装A |
3楼2011-07-26 22:41:25
kun2199
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 675.4
- 散金: 2
- 帖子: 204
- 在线: 299.4小时
- 虫号: 1034423
- 注册: 2010-06-02
- 专业: 细胞、亚细胞结构与功能
4楼2011-07-31 22:59:26
