应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：关于重组质粒目的条带丢失
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
101/1返回列表
查看: 2002  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

diduqiong

木虫 (初入文坛)

[求助] 求助：关于重组质粒目的条带丢失

提质粒酶切，做好的重组质粒有时候提得到含目的条带的有时候提出来酶切不开，电泳看看跟空载质粒一样大，都是从同一个划线平板上接的菌，这是为什么啊，跟培养时间有关系吗？难道培养的时间长了会把目的条带丢失吗？有木有童鞋跟我有一样的经历啊?
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
狗屎养鲜花
1楼 2011-05-31 10:32:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sfb1020

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-31 11:08:40
diduqiong(金币+1): 谢谢 2011-05-31 11:23:46
出现了假阳性，培养时间不能过长，时间太长会出现卫星菌落。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-05-31 10:53:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3, EPI+1): 2011-05-31 12:45:43
diduqiong(金币+3): 2011-05-31 12:51:41
1:你确定你的目的条带连接上了吗？还是已经验证连接上了，然后提质粒觉得不对。
2：一般你的目的条带如果过于小的话，连到载体上，跑出来的电泳结果是和空载体一样大的，然后单酶切或者双酶切就可以看出来你连接的目的片段了。
3：建议你用你提的质粒当模板做个PCR看看有没有条带。
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-31 12:07:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

diduqiong

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-05-30 16:07:08:
1:你确定你的目的条带连接上了吗？还是已经验证连接上了，然后提质粒觉得不对。
2：一般你的目的条带如果过于小的话，连到载体上，跑出来的电泳结果是和空载体一样大的，然后单酶切或者双酶切就可以看出来你连接 ...

已经连上了，条带一千多，第一次接摇瓶提质粒，电泳验证比原质粒大，当时忘记做酶切验证一下，就划了线放冰箱里了，现在同一块平板上的接摇瓶过夜之后提出来电泳跟原来的差不多大，就想着酶切一下，竟然切不开了，这是怎么回事啊
赞一下 回复此楼
狗屎养鲜花
4楼2011-05-31 12:21:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seahow

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
diduqiong(金币+1): 谢谢！做个PCR试试 2011-05-31 15:53:08
dhd997(金币+3): 欢迎交流 2011-06-01 08:33:25
我觉得您说的并不清楚；
既然是和空载一样，那么是没有克隆成功，这是必然的； 如果，说培养时间长，片段丢失，那是不可能的；

如果，你认为成功了，你随便切一个位点即可，和空载体比较分子量即可；或者PCR鉴定；或者测序；或者你的酶切位点对甲基化敏感。

希望对你有帮助
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-05-31 14:42:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-06-01 08:33:38
引用回帖:
Originally posted by diduqiong at 2011-05-31 12:21:49:
已经连上了，条带一千多，第一次接摇瓶提质粒，电泳验证比原质粒大，当时忘记做酶切验证一下，就划了线放冰箱里了，现在同一块平板上的接摇瓶过夜之后提出来电泳跟原来的差不多大，就想着酶切一下，竟然切不开 ...

你最好划出单克隆验证一下，就是挑几个单克隆分别划线，然后进行PCR验证，我怀疑是不是你当时没有验证的菌不纯，里面有连接上的，也有空载体。。。很有可能噢。。。你说呢？
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-05-31 15:54:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

diduqiong

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-05-30 19:54:34:
你最好划出单克隆验证一下，就是挑几个单克隆分别划线，然后进行PCR验证，我怀疑是不是你当时没有验证的菌不纯，里面有连接上的，也有空载体。。。很有可能噢。。。你说呢？

恩，是的，我现在也在怀疑这个，当时划线的菌很可能不是但菌落，早上都要愁死啦，下午就有思路啦，谢谢大家！O(∩_∩)O~
赞一下 回复此楼
狗屎养鲜花
7楼2011-05-31 16:02:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见
赞一下
8楼2011-06-01 00:17:11
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

漓江魂

铜虫 (小有名气)
楼主用的是什么感受态呀？  载体会不会是那种干扰rna 很容易重组的
赞一下 回复此楼
9楼2011-06-01 00:39:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

diduqiong

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 漓江魂 at 2011-05-31 04:39:30:
楼主用的是什么感受态呀？  载体会不会是那种干扰rna 很容易重组的

什么是干扰RNA
回复此楼
狗屎养鲜花
10楼2011-06-01 09:41:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 diduqiong 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂求助 +10 想换手机不想解� 2026-04-02 13/650 2026-04-05 09:41 by sam3303
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +11 哇呼哼呼哼 2026-04-01 12/600 2026-04-04 23:17 by 永字号
[考研] 一志愿安徽某211 0703化学总分339求调剂 +6 晚风不晚 2026-04-04 6/300 2026-04-04 20:11 by dongzh2009
[考研] 272求调剂 +4 松柏常青5 2026-04-03 4/200 2026-04-04 17:03 by babysonlkd
[考研] 求调剂：085600材料与化工，考材科基，总分319 +21 678lucky 2026-03-31 26/1300 2026-04-04 16:22 by dongzh2009
[考研] 一志愿东北大学085901土木专硕345求调剂 +3 zxt11111 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:21 by 土木硕士招生
[考研] 278求调剂 +6 Yy7400 2026-04-03 6/300 2026-04-04 09:53 by zhangdingwa
[考研] 数一英一274机械调剂 +4 星陨流霞 2026-04-04 5/250 2026-04-04 09:35 by liucky
[考研] 282求调剂 +20 ycy1201 2026-04-01 22/1100 2026-04-04 00:42 by userper
[考研] 350一志愿北京航空航天大学08500材料科学与工程求调剂 +5 kjnasfss 2026-04-03 5/250 2026-04-03 22:29 by 无际的草原
[考研] 兽医调剂 +3 wh119216 2026-04-02 3/150 2026-04-03 19:34 by zrongyan
[考研] 338求调剂 +4 zzz，，r 2026-04-03 4/200 2026-04-03 16:39 by lijunpoly
[考研] 366求调剂一志愿东北大学 +8 运气来得若有似� 2026-04-02 8/400 2026-04-02 21:39 by dongzh2009
[考研] 一志愿大工学硕，求调剂 +4 yub0811 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:36 by 百灵童888
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-04-02 4/200 2026-04-02 13:03 by yulian1987
[考研] 一志愿9初试366 本双非求调剂 +4 运气来得若有似� 2026-04-02 4/200 2026-04-02 09:56 by guanxin1001
[考研] 348环境工程调剂 +3 吴彦祖24k 2026-04-01 3/150 2026-04-02 09:14 by nanaliuyun
[考研] 一志愿西安交大材料学硕（英一数二）347，求调剂到高分子/材料相关专业 +7 zju51 2026-03-31 9/450 2026-04-01 19:35 by CFQZAFU
[考研] 材料工程专硕求调剂 +10 hyl3153942 2026-03-29 10/500 2026-03-31 16:31 by hypershenger
[考博] 材料专业申博 +5 杜雨婷dyt 2026-03-29 5/250 2026-03-31 11:19 by oooqiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭