应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：关于重组质粒目的条带丢失
51/1返回列表
查看: 1974  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

diduqiong

木虫 (初入文坛)

[求助] 求助：关于重组质粒目的条带丢失

提质粒酶切，做好的重组质粒有时候提得到含目的条带的有时候提出来酶切不开，电泳看看跟空载质粒一样大，都是从同一个划线平板上接的菌，这是为什么啊，跟培养时间有关系吗？难道培养的时间长了会把目的条带丢失吗？有木有童鞋跟我有一样的经历啊?
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
狗屎养鲜花
1楼 2011-05-31 10:32:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seahow

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
diduqiong(金币+1): 谢谢！做个PCR试试 2011-05-31 15:53:08
dhd997(金币+3): 欢迎交流 2011-06-01 08:33:25
我觉得您说的并不清楚；
既然是和空载一样，那么是没有克隆成功，这是必然的； 如果，说培养时间长，片段丢失，那是不可能的；

如果，你认为成功了，你随便切一个位点即可，和空载体比较分子量即可；或者PCR鉴定；或者测序；或者你的酶切位点对甲基化敏感。

希望对你有帮助
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-05-31 14:42:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

sfb1020

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-31 11:08:40
diduqiong(金币+1): 谢谢 2011-05-31 11:23:46
出现了假阳性，培养时间不能过长，时间太长会出现卫星菌落。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-05-31 10:53:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3, EPI+1): 2011-05-31 12:45:43
diduqiong(金币+3): 2011-05-31 12:51:41
1:你确定你的目的条带连接上了吗？还是已经验证连接上了，然后提质粒觉得不对。
2：一般你的目的条带如果过于小的话，连到载体上，跑出来的电泳结果是和空载体一样大的，然后单酶切或者双酶切就可以看出来你连接的目的片段了。
3：建议你用你提的质粒当模板做个PCR看看有没有条带。
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-31 12:07:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

diduqiong

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-05-30 16:07:08:
1:你确定你的目的条带连接上了吗？还是已经验证连接上了，然后提质粒觉得不对。
2：一般你的目的条带如果过于小的话，连到载体上，跑出来的电泳结果是和空载体一样大的，然后单酶切或者双酶切就可以看出来你连接 ...

已经连上了，条带一千多，第一次接摇瓶提质粒，电泳验证比原质粒大，当时忘记做酶切验证一下，就划了线放冰箱里了，现在同一块平板上的接摇瓶过夜之后提出来电泳跟原来的差不多大，就想着酶切一下，竟然切不开了，这是怎么回事啊
赞一下 回复此楼
狗屎养鲜花
4楼2011-05-31 12:21:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 265求调剂 +9 梁梁校校 2026-03-19 9/450 2026-03-20 12:33 by lature00
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 3/150 2026-03-20 11:58 by 呱呱呱呱叫
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 6/300 2026-03-19 17:18 by fei626-918
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 化学工程321分求调剂 +15 大米饭！ 2026-03-15 18/900 2026-03-18 14:52 by haxia
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +7 ZY-05 2026-03-13 8/400 2026-03-18 14:13 by 007_lilei
[考研] 生物学071000 329分求调剂 +3 我爱生物生物爱� 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:12 by macy2011
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 321求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭