应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重组质粒PCR的taq酶选择！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 2100  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】重组质粒PCR的taq酶选择！ 已有9人参与

目的片段被T/A克隆进pUCM-T vector中，现把酶切位点EcoRⅠ/BamHⅠ设计进引物中，想把目的片段扩增出来，目的片段大小1.6kb，有文章用Pfu酶PCR，好像Pfu酶的扩增效率很低，能用LA Taq DNA polymerase么？
补充：Pfu酶的PCR产物是否具有A末端，便于后续的T/A克隆？？？？高人指点一二！

[ Last edited by feiye2214 on 2010-5-3 at 22:57 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-05-03 16:46:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3):good 2010-05-03 17:10
普通Taq酶即可~1.6不算长，到时候挑多几个去测序就完事了
当然，用质粒做模板是非常好扩的~所以用Pfu也无所谓，适当延长延伸时间
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-05-03 16:57:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):最近很活跃，谢谢支持生物科学版！ 2010-05-04 08:14
用普通的高保真酶就可以了，片段不算长
赞一下(2人) 回复此楼
终于熬成木虫了……
3楼2010-05-03 17:09:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lingn

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-03 23:01
LA tag的保真性不高，推荐用KOD，我们实验室一直在用，4、5k以内的都没问题，扩增效率也不错
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-05-03 17:30:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nnsulei

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
普通的rTaq酶应该就可以的～～
赞一下(1人) 回复此楼
努力做就有结果～
5楼2010-05-03 19:46:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaiyf

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 2010-05-04 08:14
普通的酶应没问题，若要保险就用高保真的酶吧
赞一下(2人) 回复此楼
多看文献，多学知识
6楼2010-05-03 20:14:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cato8163

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):不错 2010-05-04 08:52
推荐你看一下，产品目录，里面有许多介绍。
建议你用：EX 酶。
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2010-05-03 21:16:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多来板块交流~~ 2010-05-03 23:00
PBO或KOD都是不错的，不过关键是要看一下你片段的GC含量和有无特殊序列，如有无大片段的连续重复，适当的调节PCR的退火温度和延伸时间。祝你成功！
赞一下(2人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
8楼2010-05-03 22:53:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):分子很奇妙 2010-05-04 08:53
pfu是不加A的，但是前阵子有人发帖子说未加A也把pfu出的片段给TA克隆上了
赞一下(2人) 回复此楼
终于熬成木虫了……
9楼2010-05-04 05:19:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
那说明那是假的高保真酶，

楼主，普通的就行了，那么短，没必要用高保真，
赞一下 回复此楼
10楼2010-05-04 10:34:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 feiye2214 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料求调剂 +11 一样YWY 2026-04-05 11/550 2026-04-05 23:36 by 来看流星雨10
[考研] 320分人工智能调剂 +8 振—TZ 2026-04-03 8/400 2026-04-05 22:33 by 范式思维
[考研] 材料调剂 +7 一样YWY 2026-04-05 8/400 2026-04-05 21:20 by 学员8dgXkO
[考研] 277求调剂 +6 瓶子PZ 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:38 by 啵啵啵0119
[考研] 322求调剂 +3 嗯哼哼恒 2026-04-05 3/150 2026-04-05 19:52 by nepu_uu
[考研] 材料专硕283求调剂 +14 试试看呗 2026-04-04 15/750 2026-04-05 19:21 by jkddd
[考研] 复试调剂 +8 春日来信- 2026-04-03 8/400 2026-04-05 18:58 by 蓝云思雨
[考研] 085600调剂 +9 东照照照 2026-04-04 9/450 2026-04-05 13:44 by ujn_zhuj
[考研] 283分求调剂 +9 试试看呗 2026-04-04 9/450 2026-04-05 10:27 by 果冻大王
[考研] 一志愿郑大0705求调剂 +3 橘十一 2026-04-02 4/200 2026-04-05 00:05 by chongya
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-03-31 5/250 2026-04-04 19:45 by 1753564080
[考研] 085701求调剂 +7 龚禹铭 2026-04-04 8/400 2026-04-04 13:49 by 小小树2024
[考研] 320求调剂 +5 振—TZ 2026-04-02 5/250 2026-04-03 14:42 by fxue1114
[考研] 266求调剂 +3 08电气工程 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:05 by 1753564080
[考研] 重庆大学材料与化工085600，初试370+，求求调剂建议 +8 shzhou_ 2026-04-01 9/450 2026-04-03 09:31 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿武汉理工0856，初试334 +3 26考研材料 2026-04-02 3/150 2026-04-02 21:22 by dongzh2009
[考研] 初试301，代码085701环境工程，本硕一致，四六级已过，有二区一作，共发表5篇论文 +6 axibli 2026-04-01 6/300 2026-04-02 13:42 by Ecowxq666！
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +9 双马尾痞老板2 2026-04-01 9/450 2026-04-02 12:14 by oooqiao
[考研] 江苏科技大学招材料研究生 +4 Su032713. 2026-04-01 5/250 2026-04-01 22:03 by cccchenso
[考研] 0817化工学硕调剂 +11 努力上岸中！ 2026-03-31 11/550 2026-04-01 20:30 by 赖春艳
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭