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feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】重组质粒PCR的taq酶选择！ 已有9人参与

目的片段被T/A克隆进pUCM-T vector中，现把酶切位点EcoRⅠ/BamHⅠ设计进引物中，想把目的片段扩增出来，目的片段大小1.6kb，有文章用Pfu酶PCR，好像Pfu酶的扩增效率很低，能用LA Taq DNA polymerase么？
补充：Pfu酶的PCR产物是否具有A末端，便于后续的T/A克隆？？？？高人指点一二！

[ Last edited by feiye2214 on 2010-5-3 at 22:57 ]
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1楼 2010-05-03 16:46:34
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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amisking(金币+3):good 2010-05-03 17:10
普通Taq酶即可~1.6不算长，到时候挑多几个去测序就完事了
当然，用质粒做模板是非常好扩的~所以用Pfu也无所谓，适当延长延伸时间
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2楼2010-05-03 16:57:09
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
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amisking(金币+1):最近很活跃，谢谢支持生物科学版！ 2010-05-04 08:14
用普通的高保真酶就可以了，片段不算长
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终于熬成木虫了……
3楼2010-05-03 17:09:16
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lingn

木虫 (正式写手)
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lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-03 23:01
LA tag的保真性不高，推荐用KOD，我们实验室一直在用，4、5k以内的都没问题，扩增效率也不错
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4楼2010-05-03 17:30:04
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nnsulei

金虫 (正式写手)
★
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普通的rTaq酶应该就可以的～～
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努力做就有结果～
5楼2010-05-03 19:46:50
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gaiyf

金虫 (正式写手)
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amisking(金币+1): 2010-05-04 08:14
普通的酶应没问题，若要保险就用高保真的酶吧
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多看文献，多学知识
6楼2010-05-03 20:14:19
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cato8163

银虫 (正式写手)
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1949stone(金币+1):不错 2010-05-04 08:52
推荐你看一下，产品目录，里面有许多介绍。
建议你用：EX 酶。
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7楼2010-05-03 21:16:31
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
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lstt09nk(金币+1):欢迎多来板块交流~~ 2010-05-03 23:00
PBO或KOD都是不错的，不过关键是要看一下你片段的GC含量和有无特殊序列，如有无大片段的连续重复，适当的调节PCR的退火温度和延伸时间。祝你成功！
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
8楼2010-05-03 22:53:12
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
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1949stone(金币+1):分子很奇妙 2010-05-04 08:53
pfu是不加A的，但是前阵子有人发帖子说未加A也把pfu出的片段给TA克隆上了
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终于熬成木虫了……
9楼2010-05-04 05:19:40
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liyong1981

金虫 (正式写手)
那说明那是假的高保真酶，

楼主，普通的就行了，那么短，没必要用高保真，
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10楼2010-05-04 10:34:12
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