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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重组质粒PCR的taq酶选择！
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feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】重组质粒PCR的taq酶选择！ 已有9人参与

目的片段被T/A克隆进pUCM-T vector中，现把酶切位点EcoRⅠ/BamHⅠ设计进引物中，想把目的片段扩增出来，目的片段大小1.6kb，有文章用Pfu酶PCR，好像Pfu酶的扩增效率很低，能用LA Taq DNA polymerase么？
补充：Pfu酶的PCR产物是否具有A末端，便于后续的T/A克隆？？？？高人指点一二！

[ Last edited by feiye2214 on 2010-5-3 at 22:57 ]
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1楼 2010-05-03 16:46:34
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多来板块交流~~ 2010-05-03 23:00
PBO或KOD都是不错的，不过关键是要看一下你片段的GC含量和有无特殊序列，如有无大片段的连续重复，适当的调节PCR的退火温度和延伸时间。祝你成功！
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
8楼2010-05-03 22:53:12
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3):good 2010-05-03 17:10
普通Taq酶即可~1.6不算长，到时候挑多几个去测序就完事了
当然，用质粒做模板是非常好扩的~所以用Pfu也无所谓，适当延长延伸时间
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2楼2010-05-03 16:57:09
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):最近很活跃，谢谢支持生物科学版！ 2010-05-04 08:14
用普通的高保真酶就可以了，片段不算长
赞一下(2人) 回复此楼
终于熬成木虫了……
3楼2010-05-03 17:09:16
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lingn

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-03 23:01
LA tag的保真性不高，推荐用KOD，我们实验室一直在用，4、5k以内的都没问题，扩增效率也不错
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-05-03 17:30:04
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