应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组质粒双酶切问题
61/1返回列表
查看: 2165  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

goumiaoge

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒双酶切问题

各位大侠，客套话就不多说了，请包涵。我在做原核表达，重组质粒转化到BL21后，做菌液PCR无目的条带，提质粒后做质粒PCR有目的条带，但是双酶切却切不出条带来，何解？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-07-31 10:15:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

futuregarden

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎新虫交流 2011-08-01 16:56:35
个人理解
1.用PCR引物测序看一下是否是目的基因。
若是，看酶切位点是否正确，
若有酶切位点，那就是酶切体系的原因了
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-07-31 10:39:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

goumiaoge

新虫 (初入文坛)
酶切体系的影响真会这么大吗？我更改过几次体系，都不行，会不会有其他什么原因。我是测序正确后才转化的。酶切位点没有问题。我如果继续切不出来的话，还能做后面的诱导表达吗？
赞一下 回复此楼
3楼2011-08-01 09:40:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cyzhgt

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！确实如此，应该先转化到克隆菌株，验证质粒正确后再转化到表达菌株。 2011-08-01 16:58:03
1、每个酶都做一个单酶切，确定内切酶没有问题
2、BL21(DE3)是表达菌株，我觉得应该先把重组质粒转到克隆菌株如DH5a、Top10上，然后再提质粒再做双酶切，因为不同菌株的基因型不一样，对质粒的修饰可能也不一样，有一些酶对甲基化的位点是没有作用的。
暂时就想到这么多。。。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-08-01 09:57:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-08-01 16:58:35
1、你提取的质粒浓度怎么样？？
2、你的双酶切体系是？？酶是否失活
建议20微升的体系，质粒2-5微升，同时做单酶切和双酶切验证
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-08-01 09:57:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

goumiaoge

新虫 (初入文坛)
我做了单酶切，双酶切体系也更改了几次，20微升体系，质粒用过10，14.质粒浓度还比较高吧，5微升marker，比marker亮许多。感谢！
赞一下 回复此楼
6楼2011-08-01 15:09:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 goumiaoge 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 268求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-14 6/300 2026-03-14 22:20 by 运气yunqi
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 295复试调剂 +5 简木ChuFront 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:29 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +3 CUcat 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:25 by JourneyLucky
[考研] 材料工程,326分，求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 材料371求调剂 +9 鳄鱼? 2026-03-11 11/550 2026-03-13 22:53 by JourneyLucky
[考研] 泣血叩求调剂恩，愿以丹心报师恩 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 一志愿河海大学085900土木水利专硕279求调剂不挑专业 +4 SunWwWwWw 2026-03-10 8/400 2026-03-13 02:23 by SunWwWwWw
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 279求调剂 +3 莫xiao 2026-03-10 4/200 2026-03-11 08:06 by 斩魂滴兔子！
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭