应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组质粒双酶切问题
51/1返回列表
查看: 2406  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

goumiaoge

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒双酶切问题

各位大侠，客套话就不多说了，请包涵。我在做原核表达，重组质粒转化到BL21后，做菌液PCR无目的条带，提质粒后做质粒PCR有目的条带，但是双酶切却切不出条带来，何解？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-07-31 10:15:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cyzhgt

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！确实如此，应该先转化到克隆菌株，验证质粒正确后再转化到表达菌株。 2011-08-01 16:58:03
1、每个酶都做一个单酶切，确定内切酶没有问题
2、BL21(DE3)是表达菌株，我觉得应该先把重组质粒转到克隆菌株如DH5a、Top10上，然后再提质粒再做双酶切，因为不同菌株的基因型不一样，对质粒的修饰可能也不一样，有一些酶对甲基化的位点是没有作用的。
暂时就想到这么多。。。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-08-01 09:57:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

futuregarden

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎新虫交流 2011-08-01 16:56:35
个人理解
1.用PCR引物测序看一下是否是目的基因。
若是，看酶切位点是否正确，
若有酶切位点，那就是酶切体系的原因了
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-07-31 10:39:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

goumiaoge

新虫 (初入文坛)
酶切体系的影响真会这么大吗？我更改过几次体系，都不行，会不会有其他什么原因。我是测序正确后才转化的。酶切位点没有问题。我如果继续切不出来的话，还能做后面的诱导表达吗？
赞一下 回复此楼
3楼2011-08-01 09:40:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-08-01 16:58:35
1、你提取的质粒浓度怎么样？？
2、你的双酶切体系是？？酶是否失活
建议20微升的体系，质粒2-5微升，同时做单酶切和双酶切验证
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-08-01 09:57:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 5/250 2026-08-31 03:29 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 zICmwzsBXjbN 2026-08-29 6/300 2026-08-31 03:16 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 6/300 2026-08-31 02:45 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 6/300 2026-08-31 02:35 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-31 02:34 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-31 02:11 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 3/150 2026-08-31 01:59 by hZiFeudZyoGR
[基金申请] 能否申诉？ +4 echo8914667 2026-08-30 5/250 2026-08-30 21:11 by echo8914667
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 5/250 2026-08-30 20:29 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-30 19:57 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-30 19:35 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 6/300 2026-08-30 19:02 by hZiFeudZyoGR
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭