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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr产物测序和克隆之后重组质粒测序结果一样吗？
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happywoheni

铁虫 (小有名气)

[求助] pcr产物测序和克隆之后重组质粒测序结果一样吗？

如题，不都是目的基因的条带吗，如果不进行表达，那么pcr产物是不是可以代表目的基因的序列呢？
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1楼 2011-07-19 19:25:34
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
送鲜花一朵
西瓜(金币+5, EPI+1): 说得很好，学习了！ 2011-07-20 16:19:06
测质粒得到的序列比测PCR产物得到的序列信息更全，准确度更高，原因如下：
1.一个测序反应一般可以测出的序列长度有800bp左右，但是有一点要注意，从引物3'的位置以后约80bp的序列信息时测不出来的（可信度很低），这就导致你测PCR产物的话无法得到完整的序列信息，而测质粒，引物一般会从载体上选择来测目的片段的首尾序列，所以能够测出完整的序列信息
2.PCR产物通过连接转化整合到载体上并在受体菌中扩增，每一个步骤都有一定概率的引起某个或某几个碱基的突变，特别是当片段内有大量串联重复片段的话在个别受体菌内是容易被剪切和修改的，因此通过PCR产物测出的结果与测质粒得到的结果并不完全一样。
综上，测重组质粒得到的结果更可信！
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
8楼2011-07-20 14:36:28
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普通回帖

shuihaizi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
happywoheni(金币+1): 2011-07-19 20:40:19
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-07-20 00:01:03
序列基本相同，但是PCR产物测序不能测出引物部分；而重组质粒可以测的比较完整，包括PCR引物也测得出来。
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2楼2011-07-19 19:42:03
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happywoheni

铁虫 (小有名气)
引物是否测得出来，和我的目的基因没什么很大关系吧
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3楼2011-07-19 20:41:27
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hc1027

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shuihaizi at 2011-07-19 19:42:03:
序列基本相同，但是PCR产物测序不能测出引物部分；而重组质粒可以测的比较完整，包括PCR引物也测得出来。

请教下PCR引物测出来有什么意义呢？和测不出来的区别是什么呢？O(∩_∩)O谢谢
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4楼2011-07-19 21:55:12
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taigongzaici

新虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-07-20 16:18:13
PCR产物测序要求较高，测序需要你自己提供引物，测序结果会缺少你部分引物
TA连接，需要连接转化，但是更完整更准确，
根据试验目的选择合适的办法
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5楼2011-07-20 09:53:40
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happywoheni

铁虫 (小有名气)
pcr产物可以反映目的基因吗？
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6楼2011-07-20 10:09:24
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清新夏青

新虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-07-20 16:18:24
一般来说 应该是一样的  pcr产物经过酶切连接 构建到质粒上 应该不会发生突变
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7楼2011-07-20 13:01:07
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逍遥狂骑

铁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
很好的问题，很好的解答，谢谢大家，又学到知识啦
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9楼2011-07-24 16:53:37
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adili
10楼2012-05-15 19:14:22
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