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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物测序出现杂峰过多的问题
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xu19850927

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物测序出现杂峰过多的问题

求助各位高手，我做的是扩增人外周血DNA片段，用宝生物的PCR试剂，电泳图显示扩增结果良好，但老师说测序结果全是杂峰和重峰，根本没法读序列，快急死了，请问可能的原因都有哪些？另外我不懂测序图谱怎么读，比如怎样是突变，哪位高手能发给我篇关于测序图谱的文章，小弟不胜感激！
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1楼 2010-11-03 15:51:10
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sherry01130

木虫 (著名写手)
我也面临了同样的问题。
我猜是你的PCR不好。。。
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2楼2010-11-19 17:06:43
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
lstt09nk(金币+1):最近很活跃 2010-11-19 17:39:57
连T载体测得么还是直接测得？

莫非GC含量较高？
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2010-11-19 17:08:37
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
模板污染，重叠的话应该是有模板污染吧，建议克隆测序~~~
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4楼2010-11-19 17:13:31
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wininghe

金虫 (职业作家)
引用回帖:
2191573楼: Originally posted by xp198766 at 2010-11-19 17:13:31:
模板污染，重叠的话应该是有模板污染吧，建议克隆测序~~~

是指被什么污染？
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5楼2012-04-08 14:10:03
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2393103楼: Originally posted by wininghe at 2012-04-08 14:10:03:
是指被什么污染？

有可能是多拷贝的片段，或者DNA不纯。。克隆一般就好了
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6楼2012-04-08 20:41:15
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超然渡陈

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是直接拿PCR产物去测序的吗？PCR产物直接测序出现杂峰的原因有：一，PCR产物没有纯化回收，本身就包含了各种东西。或者本身就有非特异条带。
二是，目的产物浓度过低，测序反应比较弱。峰图信号低，表现为杂峰，也就是是由于样品信号强度太低，干扰信号强度就相对明显了。
三是，PCR过程中出现错误，某处的碱基丢失了，于是造成样品中一部分模板序列和另一部分模板序列在某一处后错开一个碱基，因此形成杂峰。
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7楼2012-04-09 15:25:29
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超然渡陈

金虫 (小有名气)
四是，产物含有高GC，但是测序的时候没有给公司注明。公司测序的时候是按普通条件测序，这样在GC区就会出现大量杂峰。
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8楼2012-04-09 15:27:17
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