24小时热门版块排行榜    

查看: 10089  |  回复: 14

ztjren

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】测序出现重叠峰是怎么回事? 已有8人参与

我是用PCR产物直接测序的,电泳图上条带很清楚也没有拖尾巴,会出现杂带吗?还有我的产物里是含染料的会有影响吗?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

bunny0512

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):华大还算还可 2010-08-25 12:08:12
我在北京。。用华大基因
在哪里~在哪里见过你~
5楼2010-08-25 10:05:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

周_yan

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-08-25 12:07:36
我认为应该不是你说的这方面原因,而是测序时的问题,测序一个反应只能准确测700bp左右,超过这些就会测不准,出现重叠峰。当然也有可能是你pcr产物的问题。
2楼2010-08-25 09:47:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ztjren

新虫 (初入文坛)

我的产物是1.9K,送去上海生工测的,好像网上对生工测序反应不太好,请教各位可有什么好的推荐,TAKARA测序如何?
3楼2010-08-25 09:58:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

周_yan

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):多少钱? 2010-08-25 12:07:54
上海博尚测序不错。
4楼2010-08-25 10:01:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxueqin

金虫 (小有名气)


1949stone(金币+1):是的 2010-08-25 12:08:22
PCR产物的问题,可能目的片段不纯,有杂事,或者是目的片段里面有AAAAAAAAAAAAAAAAAA之类的,也会造成出现杂峰
6楼2010-08-25 10:12:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

won7

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):有可能 2010-08-25 12:08:31
如果在600bp以内,峰比较尖但出现重叠峰,基本可以肯定是产物杂合,如二倍体或多倍体的核目的基因是杂合的。
7楼2010-08-25 10:47:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ztjren

新虫 (初入文坛)

我送样的时候注明了是未纯化的PCR产物,难道生工直接拿来测序了么?
8楼2010-08-25 11:56:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

怎么都行

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):很好,很详细~~ 2010-08-25 12:30:54
引用回帖:
Originally posted by ztjren at 2010-08-25 11:56:34:
我送样的时候注明了是未纯化的PCR产物,难道生工直接拿来测序了么?

对你这个问题而言产物杂合跟纯不纯化没关系。如上楼所说,你如果是扩增多倍体的某段基因序列,在某个碱基座位上本来就存在等位基因的差异或SNP,那你扩增得到的PCR产物虽然长度相同,但其实是杂和产物,产物分子的碱基序列不是统一的,你用PCR产物直接测序,在等位基因有差异或SNP位点上必然是套峰。这种情况你该克隆挑单菌落测序了。
9楼2010-08-25 12:12:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ztjren

新虫 (初入文坛)

原来是这个意思,学习了,请教若真是多倍体的话等位基因上的差异怎么通过克隆来区分开来呢,还有即便测出序列了又如何能代表该多倍体的基因,不会用多条序列来表示吧?我不太懂可能问的比较幼稚,请大家赐教。
我扩增的是肝吸虫的18S
10楼2010-08-25 12:42:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ztjren 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +3 vv迷 2026-03-22 3/150 2026-03-22 15:18 by 杨杨杨紫
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +5 holy J 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:42 by Catalysis25
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 265求调剂 +3 Jack?k?y 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:17 by JourneyLucky
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 材料工程(专)一志愿985 初试335求调剂 +3 hiloiy 2026-03-17 4/200 2026-03-21 03:04 by JourneyLucky
[考研] 材料 336 求调剂 +3 An@. 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:39 by JourneyLucky
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华南师大 070300(化学)304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
信息提示
请填处理意见