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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】测序出现重叠峰是怎么回事？
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ztjren

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】测序出现重叠峰是怎么回事？ 已有8人参与

我是用PCR产物直接测序的，电泳图上条带很清楚也没有拖尾巴，会出现杂带吗？还有我的产物里是含染料的会有影响吗？
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1楼 2010-08-25 09:30:11
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ztjren

新虫 (初入文坛)
我的产物是1.9K，送去上海生工测的，好像网上对生工测序反应不太好，请教各位可有什么好的推荐，TAKARA测序如何？
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3楼2010-08-25 09:58:48
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ztjren

新虫 (初入文坛)
我送样的时候注明了是未纯化的PCR产物，难道生工直接拿来测序了么？
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8楼2010-08-25 11:56:34
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ztjren

新虫 (初入文坛)
原来是这个意思，学习了，请教若真是多倍体的话等位基因上的差异怎么通过克隆来区分开来呢，还有即便测出序列了又如何能代表该多倍体的基因，不会用多条序列来表示吧？我不太懂可能问的比较幼稚，请大家赐教。
我扩增的是肝吸虫的18S
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10楼2010-08-25 12:42:00
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ztjren

新虫 (初入文坛)
没具体说重叠峰在什么位置，回邮件说再加大量测，结果又说没信号
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12楼2010-08-26 14:01:48
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ztjren

新虫 (初入文坛)
如此看来产生重叠峰的原因有可能是非特异性扩增产生的杂带，或者片段太长自身碱基互补造成的吗，
若杂带量小到电泳都看不出来，应该不至于影响到测序吧，如果是条带大小比较接近的非特异扩增如何能通过克隆来区分呢，非目的基因不也会一起克隆进去么？
只有因片段互补造成的才可以用克隆来解决吧
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14楼2010-08-26 16:18:13
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