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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教一个关于测序峰图的问题
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wawjp

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教一个关于测序峰图的问题

俺有一个测序峰图，双峰的，不知道是什么原因造成的，下面这个图是上游测的，质粒，在不到100bp的地方就出现了双峰，然后后面就变成了下面那个图的样子，在后面还出现了同样双峰的情况，下游说是没有信号，不知道到底是怎么回事，烦请高手指点一二，多谢！
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1楼 2011-07-22 10:23:01
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wawjp(金币+2): 恩，多谢多谢！ 2011-07-22 11:13:47
西瓜(金币+5, EPI+1): 专业的专家 2011-07-22 11:50:07
出现套峰，一般都是因为模板不纯引起的，这是由于在接种时没有挑单菌落导致的，当两个以上的正常的克隆（插入片段方向相反），或正常克隆与空载体混在一起，而通过酶切和PCR鉴定很难看出异常，尤其在T-A克隆时经常碰到。
解决办法：重新涂平板挑单菌落测序。需要注意的是，重新进行PCR反应或者酶切鉴定仅能证明该克隆含有插入片段，并不足以证明模板的单一。
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loveskyzhou
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2楼2011-07-22 10:52:59
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-07-22 10:52:59:
出现套峰，一般都是因为模板不纯引起的，这是由于在接种时没有挑单菌落导致的，当两个以上的正常的克隆（插入片段方向相反），或正常克隆与空载体混在一起，而通过酶切和PCR鉴定很难看出异常，尤其在T-A克隆时经常 ...

你好，我是路过的菜。  能不能告诉下这个峰图是咋看的？  我看并不是一个碱基对应一个峰啊？？
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我会绕一个圈，走回到实验室
3楼2011-07-25 10:06:49
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
正常的测序结果都是一个峰代表一个碱基，并且两个峰之间是很独立的，这个峰图由于模板不纯而导致出现了套峰，结果是不可信的
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4楼2011-07-25 10:41:01
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起沃尔特与

木虫 (小有名气)
会不会是缺失突变？
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远见胜于经验。
5楼2013-04-06 18:15:00
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wuxiyan

铁虫 (初入文坛)
双峰可能是双模版吧
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我要成功
6楼2015-01-15 14:23:49
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