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wawjp

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教一个关于测序峰图的问题

俺有一个测序峰图,双峰的,不知道是什么原因造成的,下面这个图是上游测的,质粒,在不到100bp的地方就出现了双峰,然后后面就变成了下面那个图的样子,在后面还出现了同样双峰的情况,下游说是没有信号,不知道到底是怎么回事,烦请高手指点一二,多谢!


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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wawjp(金币+2): 恩,多谢多谢! 2011-07-22 11:13:47
西瓜(金币+5, EPI+1): 专业的专家 2011-07-22 11:50:07
出现套峰,一般都是因为模板不纯引起的,这是由于在接种时没有挑单菌落导致的,当两个以上的正常的克隆(插入片段方向相反),或正常克隆与空载体混在一起,而通过酶切和PCR鉴定很难看出异常,尤其在T-A克隆时经常碰到。
解决办法:重新涂平板挑单菌落测序。需要注意的是,重新进行PCR反应或者酶切鉴定仅能证明该克隆含有插入片段,并不足以证明模板的单一。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-07-22 10:52:59
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-07-22 10:52:59:
出现套峰,一般都是因为模板不纯引起的,这是由于在接种时没有挑单菌落导致的,当两个以上的正常的克隆(插入片段方向相反),或正常克隆与空载体混在一起,而通过酶切和PCR鉴定很难看出异常,尤其在T-A克隆时经常 ...

你好,我是路过的菜。  能不能告诉下这个峰图是咋看的?  我看并不是一个碱基对应一个峰啊??
我会绕一个圈,走回到实验室
3楼2011-07-25 10:06:49
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

正常的测序结果都是一个峰代表一个碱基,并且两个峰之间是很独立的,这个峰图由于模板不纯而导致出现了套峰,结果是不可信的
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-07-25 10:41:01
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起沃尔特与

木虫 (小有名气)

会不会是缺失突变?
远见胜于经验。
5楼2013-04-06 18:15:00
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wuxiyan

铁虫 (初入文坛)

双峰可能是双模版吧
我要成功
6楼2015-01-15 14:23:49
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