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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】测序出现重叠峰是怎么回事？
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ztjren

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】测序出现重叠峰是怎么回事？ 已有8人参与

我是用PCR产物直接测序的，电泳图上条带很清楚也没有拖尾巴，会出现杂带吗？还有我的产物里是含染料的会有影响吗？
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1楼 2010-08-25 09:30:11
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怎么都行

银虫 (小有名气)
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lstt09nk(金币+3):很好，很详细~~ 2010-08-25 12:30:54
引用回帖:
Originally posted by ztjren at 2010-08-25 11:56:34:
我送样的时候注明了是未纯化的PCR产物，难道生工直接拿来测序了么？

对你这个问题而言产物杂合跟纯不纯化没关系。如上楼所说，你如果是扩增多倍体的某段基因序列，在某个碱基座位上本来就存在等位基因的差异或SNP，那你扩增得到的PCR产物虽然长度相同，但其实是杂和产物，产物分子的碱基序列不是统一的，你用PCR产物直接测序，在等位基因有差异或SNP位点上必然是套峰。这种情况你该克隆挑单菌落测序了。
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9楼2010-08-25 12:12:24
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周_yan

木虫 (小有名气)
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-08-25 12:07:36
我认为应该不是你说的这方面原因，而是测序时的问题，测序一个反应只能准确测700bp左右，超过这些就会测不准，出现重叠峰。当然也有可能是你pcr产物的问题。
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2楼2010-08-25 09:47:14
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ztjren

新虫 (初入文坛)
我的产物是1.9K，送去上海生工测的，好像网上对生工测序反应不太好，请教各位可有什么好的推荐，TAKARA测序如何？
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3楼2010-08-25 09:58:48
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周_yan

木虫 (小有名气)
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1949stone(金币+1):多少钱？ 2010-08-25 12:07:54
上海博尚测序不错。
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4楼2010-08-25 10:01:01
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