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ztjren

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】测序出现重叠峰是怎么回事？已有8人参与

我是用PCR产物直接测序的，电泳图上条带很清楚也没有拖尾巴，会出现杂带吗？还有我的产物里是含染料的会有影响吗？

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1楼 2010-08-25 09:30:11

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怎么都行

银虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):很好，很详细~~ 2010-08-25 12:30:54

引用回帖:

Originally posted by ztjren at 2010-08-25 11:56:34:
我送样的时候注明了是未纯化的PCR产物，难道生工直接拿来测序了么？

对你这个问题而言产物杂合跟纯不纯化没关系。如上楼所说，你如果是扩增多倍体的某段基因序列，在某个碱基座位上本来就存在等位基因的差异或SNP，那你扩增得到的PCR产物虽然长度相同，但其实是杂和产物，产物分子的碱基序列不是统一的，你用PCR产物直接测序，在等位基因有差异或SNP位点上必然是套峰。这种情况你该克隆挑单菌落测序了。