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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】测序出现重叠峰是怎么回事？
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怎么都行

银虫 (小有名气)
rRNA基因保守性很强，按说同一个物种的rDNA不该有差别，否则就变成另一个种群了。看来你的套峰还真有可能是测序本身的问题，套峰出现在什么位置，在测序结果的首尾还是中间？
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11楼2010-08-25 12:58:26
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ztjren

新虫 (初入文坛)
没具体说重叠峰在什么位置，回邮件说再加大量测，结果又说没信号
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12楼2010-08-26 14:01:48
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
很可能是有条带大小比较接近的非特异扩增了，或者一些非特异扩增的量还比较小在琼脂糖胶上没看出来。尤其是片段已经达到了1.9个KP，这么长肯定是有问题的啦，建议你做克隆后再送测序，如果实在做不了克隆那就做一下二次PCR，看有没有杂带，然后再跑一下垂直板看看有没有杂带，如果都没有那生工还测不出来那就让他们直接能滚多远就滚多远吧，Takara的测序也那样，没和生工有啥差别，现在Takara已经是国产试剂了，都是大连产的啦。
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13楼2010-08-26 15:23:13
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ztjren

新虫 (初入文坛)
如此看来产生重叠峰的原因有可能是非特异性扩增产生的杂带，或者片段太长自身碱基互补造成的吗，
若杂带量小到电泳都看不出来，应该不至于影响到测序吧，如果是条带大小比较接近的非特异扩增如何能通过克隆来区分呢，非目的基因不也会一起克隆进去么？
只有因片段互补造成的才可以用克隆来解决吧
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14楼2010-08-26 16:18:13
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silicare

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优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个就放心吧，你送样过去 商家都会首先胶回收的

测不出来原因很多

一是你的引物要特异
二是浓度要足够

另外，测序是一门技术，也会设计仪器和pcr，毛细管电泳等等

如果一家不行，可以换一家
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15楼2010-08-26 18:03:32
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