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怎么都行

银虫 (小有名气)

rRNA基因保守性很强,按说同一个物种的rDNA不该有差别,否则就变成另一个种群了。看来你的套峰还真有可能是测序本身的问题,套峰出现在什么位置,在测序结果的首尾还是中间?
11楼2010-08-25 12:58:26
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ztjren

新虫 (初入文坛)

没具体说重叠峰在什么位置,回邮件说再加大量测,结果又说没信号
12楼2010-08-26 14:01:48
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amilie030312

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
很可能是有条带大小比较接近的非特异扩增了,或者一些非特异扩增的量还比较小在琼脂糖胶上没看出来。尤其是片段已经达到了1.9个KP,这么长肯定是有问题的啦,建议你做克隆后再送测序,如果实在做不了克隆那就做一下二次PCR,看有没有杂带,然后再跑一下垂直板看看有没有杂带,如果都没有那生工还测不出来那就让他们直接能滚多远就滚多远吧,Takara的测序也那样,没和生工有啥差别,现在Takara已经是国产试剂了,都是大连产的啦。
13楼2010-08-26 15:23:13
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ztjren

新虫 (初入文坛)

如此看来产生重叠峰的原因有可能是非特异性扩增产生的杂带,或者片段太长自身碱基互补造成的吗,
若杂带量小到电泳都看不出来,应该不至于影响到测序吧,如果是条带大小比较接近的非特异扩增如何能通过克隆来区分呢,非目的基因不也会一起克隆进去么?
只有因片段互补造成的才可以用克隆来解决吧
14楼2010-08-26 16:18:13
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silicare

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个就放心吧,你送样过去 商家都会首先胶回收的

测不出来原因很多

一是你的引物要特异
二是浓度要足够

另外,测序是一门技术,也会设计仪器和pcr,毛细管电泳等等

如果一家不行,可以换一家
15楼2010-08-26 18:03:32
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