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ztjren

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 1069873
注册: 2010-08-05
专业: 传染病流行病学

[交流] 【求助/交流】测序出现重叠峰是怎么回事？已有8人参与

我是用PCR产物直接测序的，电泳图上条带很清楚也没有拖尾巴，会出现杂带吗？还有我的产物里是含染料的会有影响吗？

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1楼 2010-08-25 09:30:11

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)

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应助: 7 (幼儿园)
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虫号: 296900
注册: 2006-11-18
专业: 动物遗传学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

很可能是有条带大小比较接近的非特异扩增了，或者一些非特异扩增的量还比较小在琼脂糖胶上没看出来。尤其是片段已经达到了1.9个KP，这么长肯定是有问题的啦，建议你做克隆后再送测序，如果实在做不了克隆那就做一下二次PCR，看有没有杂带，然后再跑一下垂直板看看有没有杂带，如果都没有那生工还测不出来那就让他们直接能滚多远就滚多远吧，Takara的测序也那样，没和生工有啥差别，现在Takara已经是国产试剂了，都是大连产的啦。