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maxwell1988金虫 (小有名气)
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【求助/交流】关于PCR产物的突变 已有4人参与
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我是个刚进入分子克隆实验的菜鸟。前段时间刚从外周血细胞中提取了其总RNA,再进行RT-PCR逆转录成cDNA。以该cDNA作为模板,进行常规的PCR。之后就是简单的割胶回收,TA克隆。 送去测序后,连续几次得到的结果都是在目的基因序列的3'端大概9个碱基处,多了一个同样的一个碱基。 如果是突变,那么为什么会在同样的地方出现同样的情况?如果是模板的问题,为什么以该模板做的其他PCR产物拿去测序却完全正确?会不会是TA克隆出了什么问题?请高手们多多指教! |
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