应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 点突变，自己设计互补的突变引物做PCR，这个PCR产物是怎么鉴定？是线性的还是环状的？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 3660  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

黑沉

金虫 (正式写手)

[求助] 点突变，自己设计互补的突变引物做PCR，这个PCR产物是怎么鉴定？是线性的还是环状的？ 已有1人参与

点突变，自己设计互补的突变引物做PCR，这个PCR产物是怎么鉴定？是线性的还是环状的？有人说产物是带缺口的环状，没明白。线性的就是和模板质粒线性化的大小一致，环状的就是和模板质粒大小一致，对吗？
参考试剂盒的说明，此PCR产物不用鉴定，直接用Dpn1酶消化，转化就能长出阳性菌，如若是线性的在大肠杆菌中又怎么长出环状的质粒呢？
初做分子这块，希望各位搭手指教，谢啦！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-31 22:01:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

to-be

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流~ 2012-04-01 17:33:45
1.PCR产物应该是环，跟原始模板一样的环，除了突变的位点。
2.DpnI消化的是混在PCR产物中的被甲基化的原始模板，剩下的是突变成功的环状DNA。
赞一下 回复此楼
生活是面镜子~
2楼2012-03-31 22:57:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑沉

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by to-be at 2012-03-31 22:57:25:
1.PCR产物应该是环，跟原始模板一样的环，除了突变的位点。
2.DpnI消化的是混在PCR产物中的被甲基化的原始模板，剩下的是突变成功的环状DNA。

我PCR产物小量跑了下电泳，质粒线性化大小的片段最亮，所以我怀疑这个PCR产物是不是就是线性化的。
我已经用.DpnI消化后转化了，结果还不知道，先等着，呵呵。
谢谢你哈，我现在就只想弄清楚这个PCR产物到底是环状的还是线性化的，呵呵……
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-03-31 23:02:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

to-be

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 黑沉 at 2012-03-31 23:02:36:
我PCR产物小量跑了下电泳，质粒线性化大小的片段最亮，所以我怀疑这个PCR产物是不是就是线性化的。
我已经用.DpnI消化后转化了，结果还不知道，先等着，呵呵。
谢谢你哈，我现在就只想弄清楚这个PCR产物到底是 ...

你怎么跑的电泳？Marker，有质粒对照？怎么就确定是线性化？
赞一下 回复此楼
生活是面镜子~
4楼2012-03-31 23:19:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑沉

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by to-be at 2012-03-31 23:19:07:
你怎么跑的电泳？Marker，有质粒对照？怎么就确定是线性化？

Marker和质粒对照都一起跑了，质粒线性化大小的条带很亮，质粒大小的条带就暗了很多了，这应该就是扩增出线性化的产物了吧。
赞一下 回复此楼
5楼2012-04-01 09:53:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

痞子无敌

金虫 (正式写手)
师兄，看到你这个帖子，我想知道引物要怎样设计才可以有环状产物这样的结果？前后引物是要完全互补还是只需要有几bp的互补？如果互补的话，退火的时候引物不会形成二聚体吗？
赞一下 回复此楼
当你当你的眼睛眯着笑
6楼2016-11-29 13:51:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你的PCR产物是线状的，有缺口的一个片段，但是e.coli会把这个缺口修复。你可以在网上找一下  Stratagene QuikChange，这个的使用说明书，上面有很详细的说明
赞一下 回复此楼
上班族，学习ing……
7楼2016-12-01 10:59:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 黑沉 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料334求调剂 +18 Eecho# 2026-04-03 18/900 2026-04-06 00:56 by fmesaito
[考研] 331求调剂 +8 于征yz 2026-04-05 8/400 2026-04-06 00:54 by fmesaito
[考研] 材料求调剂 +11 一样YWY 2026-04-05 11/550 2026-04-05 23:36 by 来看流星雨10
[考研] 296求调剂 +3 汪！？！ 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:13 by 啵啵啵0119
[考研] 385分 生物学（071000）求调剂 +11 qf626 2026-04-01 11/550 2026-04-05 17:35 by Ecowxq666！
[考研] 328分调剂 +6 门men 2026-04-04 6/300 2026-04-05 13:40 by imissbao
[考研] 数一英一274机械调剂 +5 星陨流霞 2026-04-04 6/300 2026-04-05 11:38 by arrow8852
[考研] 324求调剂 +14 想上学求调 2026-04-02 15/750 2026-04-04 20:31 by 无际的草原
[考研] 调剂 +9 19945159693 2026-04-03 10/500 2026-04-04 20:16 by dongzh2009
[考研] 294求调剂 +6 Grey_Ey 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:46 by 欣喜777
[考研] 085600专硕材料与化工348分求调剂 +10 上学啦！ 2026-04-01 11/550 2026-04-03 14:13 by 百灵童888
[考研] 一志愿华东理工大学，080500学硕，317分，求调剂 +13 s1145 2026-03-31 15/750 2026-04-03 11:44 by msi123
[考研] 311求调剂一志愿合肥工业大学 +15 秋二十二 2026-03-30 15/750 2026-04-03 10:19 by linyelide
[考研] 312 化工或制药调剂 +8 小小墨123 2026-04-02 9/450 2026-04-03 09:12 by zhouxiaoyu
[考研] 326求调剂 +3 9ahye 2026-04-02 4/200 2026-04-03 08:43 by Jaylen.
[考研] 085600，320分求调剂 +6 大馋小子 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:54 by dongzh2009
[考研] 362求调剂 +14 西南交材料专硕3 2026-03-31 14/700 2026-04-02 17:50 by yunlongyang
[考研] 318求调剂，计算材料方向 +10 吸喵有害笙命 2026-04-01 11/550 2026-04-02 16:29 by oooqiao
[考研] 322求调剂 +8 三水sss 2026-04-01 8/400 2026-04-01 10:19 by 唐沐儿
[考研] 调剂 +4 GK72 2026-03-30 4/200 2026-03-30 20:32 by dick_runner
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭