应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 点突变，自己设计互补的突变引物做PCR，这个PCR产物是怎么鉴定？是线性的还是环状的？
51/1返回列表
查看: 3445  |  回复: 6
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

黑沉

金虫 (正式写手)

[求助] 点突变，自己设计互补的突变引物做PCR，这个PCR产物是怎么鉴定？是线性的还是环状的？已有1人参与

点突变，自己设计互补的突变引物做PCR，这个PCR产物是怎么鉴定？是线性的还是环状的？有人说产物是带缺口的环状，没明白。线性的就是和模板质粒线性化的大小一致，环状的就是和模板质粒大小一致，对吗？
参考试剂盒的说明，此PCR产物不用鉴定，直接用Dpn1酶消化，转化就能长出阳性菌，如若是线性的在大肠杆菌中又怎么长出环状的质粒呢？
初做分子这块，希望各位搭手指教，谢啦！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2012-03-31 22:01:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

to-be

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 黑沉 at 2012-03-31 23:02:36:
我PCR产物小量跑了下电泳，质粒线性化大小的片段最亮，所以我怀疑这个PCR产物是不是就是线性化的。
我已经用.DpnI消化后转化了，结果还不知道，先等着，呵呵。
谢谢你哈，我现在就只想弄清楚这个PCR产物到底是 ...

你怎么跑的电泳？Marker，有质粒对照？怎么就确定是线性化？
赞一下 回复此楼
生活是面镜子~
4楼2012-03-31 23:19:07
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

to-be

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流~ 2012-04-01 17:33:45
1.PCR产物应该是环，跟原始模板一样的环，除了突变的位点。
2.DpnI消化的是混在PCR产物中的被甲基化的原始模板，剩下的是突变成功的环状DNA。
赞一下 回复此楼
生活是面镜子~
2楼2012-03-31 22:57:25
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑沉

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by to-be at 2012-03-31 22:57:25:
1.PCR产物应该是环，跟原始模板一样的环，除了突变的位点。
2.DpnI消化的是混在PCR产物中的被甲基化的原始模板，剩下的是突变成功的环状DNA。

我PCR产物小量跑了下电泳，质粒线性化大小的片段最亮，所以我怀疑这个PCR产物是不是就是线性化的。
我已经用.DpnI消化后转化了，结果还不知道，先等着，呵呵。
谢谢你哈，我现在就只想弄清楚这个PCR产物到底是环状的还是线性化的，呵呵……
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-03-31 23:02:36
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑沉

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by to-be at 2012-03-31 23:19:07:
你怎么跑的电泳？Marker，有质粒对照？怎么就确定是线性化？

Marker和质粒对照都一起跑了，质粒线性化大小的条带很亮，质粒大小的条带就暗了很多了，这应该就是扩增出线性化的产物了吧。
赞一下 回复此楼
5楼2012-04-01 09:53:32
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭