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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎样消除PCR产物中的引物二聚体？
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mingcui1003

新虫 (初入文坛)

[求助] 怎样消除PCR产物中的引物二聚体？

巢式PCR产物有两条小的片段（下图），小妹初涉分子，不知是引物还是引物二聚体？实验用的引物是真菌的带荧光引物FAM-FF390/FR1，产物大小为400bp左右，目的是为了做T-RFLP，模板用的是前一次PCR产物（约1450bp），模板条带不是很亮，不知这个有没有影响？
怎样消除PCR产物中的引物二聚体？
PCR图片，上面是目标条带
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1楼 2013-05-28 09:31:17
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protura

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mingcui1003(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-28 10:36:17
应该是引物二聚体之类的，可以适当减少引物用量试试是否能消除。
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2楼2013-05-28 09:54:45
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peng~yu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mingcui1003(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-28 10:36:26
mingcui1003: 金币+3, ★有帮助, 谢谢！ 2013-08-16 15:17:15
引物二聚体形成的原因主要有一下几点~
1.体系的引物过多，系统过于复杂~从这一点出发的话你应该减少一些引物的种类和添加量~不过要是多重PCR的话自动省略掉引物种类；
2.体系中模板的量太少~从这个方面出发~我觉得你的目的条带的还是蛮亮的~这方面应该不是问题~
3.做巢式PCR之前的一定要将原始的上一步的PCR产物进行稀释~我觉得你那两天引物二聚体的条带就是因为上一步的引物浓度态度造成的~
4.引物设计问题~引物在设计过程中的误差也可能会导致二聚体的产生
希望我的回答可以帮助到你~
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3楼2013-05-28 09:55:15
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mingcui1003

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by peng~yu at 2013-05-28 09:55:15
引物二聚体形成的原因主要有一下几点~
1.体系的引物过多，系统过于复杂~从这一点出发的话你应该减少一些引物的种类和添加量~不过要是多重PCR的话自动省略掉引物种类；
2.体系中模板的量太少~从这个方面出发~我觉得 ...

谢谢，今天我用纯化试剂盒纯化了一下，就好多了，基本上去掉了这些条带，但还是有一点点，应该不影响后面的实验
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4楼2013-05-28 21:26:47
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