| 查看: 2088 | 回复: 3 | ||||
mingcui1003新虫 (初入文坛)
|
[求助]
怎样消除PCR产物中的引物二聚体？
|
巢式PCR产物有两条小的片段（下图），小妹初涉分子，不知是引物还是引物二聚体？实验用的引物是真菌的带荧光引物FAM-FF390/FR1，产物大小为400bp左右，目的是为了做T-RFLP，模板用的是前一次PCR产物（约1450bp），模板条带不是很亮，不知这个有没有影响？ PCR图片，上面是目标条带 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 核酸生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有145人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR引物二聚体问题
已经有12人回复
- 定量PCR-引物二聚体问题
已经有5人回复
- 请大家帮忙看看引物二聚体的问题
已经有5人回复
- RT—PCR引物、条带问题，新手求助，求意见，求建议！
已经有9人回复
- 引物二聚体会不会影响目的基因的迁移?
已经有9人回复
- 总dna电泳有条带，但PCR后只有引物二聚体
已经有23人回复
- 求解：Taqman MGB实时荧光定量PCR空白对照组荧光信号很强怎么回事？
已经有10人回复
- 定点突变引物设计
已经有8人回复
- PCR的引物扩增后会被降解掉吗？
已经有10人回复
- 荧光定量PCR
已经有12人回复
- 空白也PCR出的两条带
已经有19人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR与半定量的RT－PCR在设计引物时有什么区别？
已经有8人回复
- 【求助/交流】有引物二聚体、非特异性扩增带是怎么回事？
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR引物二聚体问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】溶解曲线法及电泳法检查引物二聚体的差异
已经有13人回复
- 【分享】PCR产物中减少引物二聚体的方法
已经有33人回复
- 【求助/交流】关于PCR的问题
已经有18人回复
2楼2013-05-28 09:54:45
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mingcui1003(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-28 10:36:26
mingcui1003: 金币+3, ★有帮助, 谢谢！ 2013-08-16 15:17:15
感谢参与，应助指数 +1
mingcui1003(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-28 10:36:26
mingcui1003: 金币+3, ★有帮助, 谢谢！ 2013-08-16 15:17:15
|
引物二聚体形成的原因主要有一下几点~ 1.体系的引物过多，系统过于复杂~从这一点出发的话你应该减少一些引物的种类和添加量~不过要是多重PCR的话自动省略掉引物种类； 2.体系中模板的量太少~从这个方面出发~我觉得你的目的条带的还是蛮亮的~这方面应该不是问题~ 3.做巢式PCR之前的一定要将原始的上一步的PCR产物进行稀释~我觉得你那两天引物二聚体的条带就是因为上一步的引物浓度态度造成的~ 4.引物设计问题~引物在设计过程中的误差也可能会导致二聚体的产生 希望我的回答可以帮助到你~  |
3楼2013-05-28 09:55:15
mingcui1003
新虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 21.3
- 红花: 1
- 帖子: 23
- 在线: 8.2小时
- 虫号: 2428498
- 注册: 2013-04-21
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
4楼2013-05-28 21:26:47
5