| 查看: 3585 | 回复: 5 | ||
mahoumeimei金虫 (小有名气)
|
[求助]
定量PCR-引物二聚体问题
|
|
前段时间做了绝对定量，融解曲线显示有杂峰，怀疑是引物二聚体。但是产物电泳图上却没有看到明显的引物二聚体。样品平行性还不错，标准曲线的斜率是0.9947。我实验目的也不需要准确地知道每个样品目标基因的copy值，只需要看到目标基因的变化趋势就好了。请问这样的话，这些结果能用吗？因为实验已经基本结束了，不想再重新设计引物折腾了。 希望大家给点建议，非常感谢！  5B-9C 2.jpg  图片1.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有106人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求高人指点qpcr问题，扩增效率太高！
已经有14人回复
- 引物二聚体会不会影响目的基因的迁移?
已经有9人回复
- 引物二聚体如何识别
已经有8人回复
- 有做过荧光定量PCR的吗？
已经有9人回复
- 求问一个问题，dNTP浓度过低是否在PCR反应中就会形成引物二聚体 谢谢
已经有5人回复
- 总dna电泳有条带，但PCR后只有引物二聚体
已经有23人回复
- SYBR荧光定量的溶解曲线
已经有10人回复
- 点突变引物设计的问题
已经有11人回复
- 求解：Taqman MGB实时荧光定量PCR空白对照组荧光信号很强怎么回事？
已经有10人回复
- 荧光定量PCR
已经有12人回复
- PCR扩不出目的基因
已经有14人回复
- 荧光定量需要3个重复样本吗
已经有12人回复
- 向RTPCR高手求助，关于RTPCR的空白对照问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR与半定量的RT－PCR在设计引物时有什么区别？
已经有8人回复
- 【求助/交流】PCR引物二聚体问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR中cdna合成的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】溶解曲线法及电泳法检查引物二聚体的差异
已经有13人回复
mahoumeimei
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 736.6
- 红花: 1
- 帖子: 205
- 在线: 124.5小时
- 虫号: 1258265
- 注册: 2011-04-07
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
2楼2013-04-07 21:12:45
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mahoumeimei: 金币+5 2013-04-08 09:35:24
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-09 10:49:53
感谢参与，应助指数 +1
mahoumeimei: 金币+5 2013-04-08 09:35:24
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-09 10:49:53
| 你的熔解曲线不是一般的有问题，从胶上看不到明显的引物二聚体不能说明其不存在。如果只是看趋势，可以直接做半定量PCR跑胶看结果。如果一定要做荧光定量，我认为你需要对体系进行优化。标准曲线的R2不错，只能说明标准曲线的线性还可以，扩增效率才是关键。你是否对PCR体系进行了优化？我觉得你可以做一下退火温度梯度，降低引物浓度。实在不行只能重新设计引物。 |
3楼2013-04-08 00:44:41
mahoumeimei
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 736.6
- 红花: 1
- 帖子: 205
- 在线: 124.5小时
- 虫号: 1258265
- 注册: 2011-04-07
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
4楼2013-04-08 09:38:05
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
5楼2013-04-09 00:54:49
aga0110125
银虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 496.5
- 散金: 6
- 帖子: 246
- 在线: 41.6小时
- 虫号: 697361
- 注册: 2009-02-06
- 专业: 细胞生物学研究中的新方法
6楼2013-04-09 10:45:49
