应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定量PCR-引物二聚体问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
61/1返回列表
查看: 3288  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

mahoumeimei

金虫 (小有名气)

[求助] 定量PCR-引物二聚体问题

前段时间做了绝对定量，融解曲线显示有杂峰，怀疑是引物二聚体。但是产物电泳图上却没有看到明显的引物二聚体。样品平行性还不错，标准曲线的斜率是0.9947。我实验目的也不需要准确地知道每个样品目标基因的copy值，只需要看到目标基因的变化趋势就好了。请问这样的话，这些结果能用吗？因为实验已经基本结束了，不想再重新设计引物折腾了。
希望大家给点建议，非常感谢！

5B-9C 2.jpg



图片1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-04-07 21:11:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahoumeimei

金虫 (小有名气)
错了，标准曲线的R2是0.9947
赞一下 回复此楼
2楼2013-04-07 21:12:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mahoumeimei: 金币+5 2013-04-08 09:35:24
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-09 10:49:53
你的熔解曲线不是一般的有问题，从胶上看不到明显的引物二聚体不能说明其不存在。如果只是看趋势，可以直接做半定量PCR跑胶看结果。如果一定要做荧光定量，我认为你需要对体系进行优化。标准曲线的R2不错，只能说明标准曲线的线性还可以，扩增效率才是关键。你是否对PCR体系进行了优化？我觉得你可以做一下退火温度梯度，降低引物浓度。实在不行只能重新设计引物。
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-08 00:44:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahoumeimei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-08 00:44:41
你的熔解曲线不是一般的有问题，从胶上看不到明显的引物二聚体不能说明其不存在。如果只是看趋势，可以直接做半定量PCR跑胶看结果。如果一定要做荧光定量，我认为你需要对体系进行优化。标准曲线的R2不错，只能说明 ...

尝试了好几个退火温度，引物浓度也做了两个。真的不可以用吗？导师等着要结果，不敢跟他说呢。
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-08 09:38:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-09 10:50:07
引用回帖:
4楼: Originally posted by mahoumeimei at 2013-04-08 09:38:05
尝试了好几个退火温度，引物浓度也做了两个。真的不可以用吗？导师等着要结果，不敢跟他说呢。...

可能是引物有二级结构吧，重新设计引物看看吧。引物很便宜的，多设计几对。还有一个办法，虽然对做定量很不好，但是你只是想要看关系，你可以设计PCR程序时，在每个循环中加入82°C 10S （熔接引物二聚体），再时时读取荧光。
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-09 00:54:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aga0110125

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果有引物二聚体也已经跑出去了
赞一下 回复此楼
6楼2013-04-09 10:45:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 mahoumeimei 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 319求调剂 +13 太容易1018 2026-04-01 13/650 2026-04-02 11:39 by Sammy2
[考研] 292求调剂 +14 是妍子也是研子 2026-03-30 14/700 2026-04-02 10:17 by sanrepian
[考研] 311求调剂 +16 zchqwer 2026-04-01 18/900 2026-04-02 10:15 by 不吃魚的貓
[考研] 321求调剂 +9 y-yh 2026-04-01 10/500 2026-04-02 10:14 by 不吃魚的貓
[考研] 377求调剂 +3 RASKIN 2026-04-02 3/150 2026-04-02 09:45 by zzchen2000
[考研] 英一数一408，总分284，二战真诚求调剂 +12 12.27 2026-03-30 14/700 2026-04-02 00:18 by 欣喜777
[考研] 307分求调剂 +14 (o~o) 2026-03-31 15/750 2026-04-01 20:43 by longlotian
[考研] 0817化工学硕调剂 +11 努力上岸中！ 2026-03-31 11/550 2026-04-01 20:30 by 赖春艳
[考研] 379求调剂 +3 ?苦瓜不苦 2026-04-01 3/150 2026-04-01 20:09 by 暮云清寒
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-04-01 5/250 2026-04-01 15:39 by 好好读书。
[考研] 085600，321分求调剂 +13 大馋小子 2026-03-31 13/650 2026-04-01 12:35 by chemdavid
[考研] 301求调剂 +8 axibli 2026-04-01 8/400 2026-04-01 09:51 by 我的船我的海
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +5 双马尾痞老板2 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:04 by oooqiao
[考研] 土木304求调剂 +5 顶级擦擦 2026-03-31 5/250 2026-04-01 08:15 by fdcxdystjk￥
[考研] 一志愿：西北大学，英一数一408-284分求调剂 +7 12.27 2026-03-27 7/350 2026-03-31 21:59 by lbsjt
[考研] 求收留 +8 1943443204 2026-03-28 8/400 2026-03-31 15:00 by -迷了路啊路
[考研] 276求调剂 +3 赵久华 2026-03-29 3/150 2026-03-31 10:06 by cal0306
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +16 李李不服输 2026-03-26 16/800 2026-03-30 17:47 by wangjy2002
[考研] 081200-314 +3 LILIQQ 2026-03-27 4/200 2026-03-28 09:41 by 保护地球你我做�
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭