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mahoumeimei金虫 (小有名气)
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[求助]
定量PCR-引物二聚体问题
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前段时间做了绝对定量，融解曲线显示有杂峰，怀疑是引物二聚体。但是产物电泳图上却没有看到明显的引物二聚体。样品平行性还不错，标准曲线的斜率是0.9947。我实验目的也不需要准确地知道每个样品目标基因的copy值，只需要看到目标基因的变化趋势就好了。请问这样的话，这些结果能用吗？因为实验已经基本结束了，不想再重新设计引物折腾了。 希望大家给点建议，非常感谢！  5B-9C 2.jpg  图片1.jpg |
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【答案】应助回帖
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| 你的熔解曲线不是一般的有问题，从胶上看不到明显的引物二聚体不能说明其不存在。如果只是看趋势，可以直接做半定量PCR跑胶看结果。如果一定要做荧光定量，我认为你需要对体系进行优化。标准曲线的R2不错，只能说明标准曲线的线性还可以，扩增效率才是关键。你是否对PCR体系进行了优化？我觉得你可以做一下退火温度梯度，降低引物浓度。实在不行只能重新设计引物。 |
3楼2013-04-08 00:44:41
mahoumeimei
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