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mahoumeimei

金虫 (小有名气)

[求助] 定量PCR-引物二聚体问题

前段时间做了绝对定量,融解曲线显示有杂峰,怀疑是引物二聚体。但是产物电泳图上却没有看到明显的引物二聚体。样品平行性还不错,标准曲线的斜率是0.9947。我实验目的也不需要准确地知道每个样品目标基因的copy值,只需要看到目标基因的变化趋势就好了。请问这样的话,这些结果能用吗?因为实验已经基本结束了,不想再重新设计引物折腾了。
希望大家给点建议,非常感谢!

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mahoumeimei

金虫 (小有名气)

错了,标准曲线的R2是0.9947
2楼2013-04-07 21:12:45
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-08 00:44:41
你的熔解曲线不是一般的有问题,从胶上看不到明显的引物二聚体不能说明其不存在。如果只是看趋势,可以直接做半定量PCR跑胶看结果。如果一定要做荧光定量,我认为你需要对体系进行优化。标准曲线的R2不错,只能说明 ...

尝试了好几个退火温度,引物浓度也做了两个。真的不可以用吗?导师等着要结果,不敢跟他说呢。
4楼2013-04-08 09:38:05
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