应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求问一个问题，dNTP浓度过低是否在PCR反应中就会形成引物二聚体 谢谢
61/1返回列表
查看: 2577  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

cuiwen_tao

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求问一个问题，dNTP浓度过低是否在PCR反应中就会形成引物二聚体 谢谢

谢谢大家哦
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-18 11:18:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 真是热心的虫虫啊 2012-07-18 13:55:35
cuiwen_tao: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-07-18 15:28:02
怎样减少减少引物二聚体？
参考见解：
1. 从引物自身着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法；
2. 可能模板有问题；
3. 模板浓度过小，适当加大模板量；
4. Taq酶，引物，Mg2+浓度可能过高，可降低它们的浓度；
5. 取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引物二聚体就会消失的；
6. 所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO，可以增强特异性；
7. PCR反应体系的配制在冰上进行，最后加TAq酶，PCR结束后，产物勿放置在室温下过长时间，有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体。
8. 增加循环数；
9. 降低退火温度后有条带，则应逐渐提高温度，若提高温度的同时产物量减少，则考虑增加镁离子浓度（根据扩增片断长度而定，片段长则相应镁离子浓度应该高一些）；
10. 若降低退火温度，发现还是只有引物二聚体，而且镁离子的浓度在 20-25mmol/l没有区别，则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀，导致吸取的试剂浓度不对。
11. 以上次的pcr产物作模板二次pcr，可以提高引物与模板的特异性，减少引物二聚体，如果两次时间间隔短的话，可以把原产物稀释100－1000倍，如果间隔较长可以稀释50－100倍。
影响平台效应的因素有哪些？
参考见解：
1、 反应试剂（dNTP或酶）稳定性的改变；
2、 终产物（如焦磷酸）的抑制效应；
3、 产物浓度超过10-5时可产生重复退火，于是会降低引物延伸速率或DNA聚合酶的活性。
4、 高浓度产物DNA双链的解链不宝剑。平台效应时的一种重要后果是由于错误引导，在开始时浓度不高的非特异产物会继续扩增，使结果的分析复杂化。
赞一下(2人) 回复此楼
coasttocoast。
3楼2012-07-18 12:02:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

cuiwen_tao

铜虫 (初入文坛)
主要是一直引物二聚体很明亮，条带没有，但是有一次我误加多了dNTP缺出现了目的条带。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-18 11:21:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)
每50μl体系加4-5μl的dNTP，这个量足够做40次以上的扩增，所以我感觉应该不是dNTP的问题，你考虑一下其他的因素吧
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-18 16:00:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-18 12:02:11
怎样减少减少引物二聚体？
参考见解：
1. 从引物自身着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法；
2. 可能模板有问题；
3. 模板浓度过小，适当加大模板量；
4. Taq酶，引物，Mg2+浓度可能过高，可降低 ...

用产物作为模版再p一次，25微升体系加多少产物呢？
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-28 19:43:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxb-abc

银虫 (小有名气)
内容已删除
回复此楼
6楼2014-10-28 09:40:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cuiwen_tao 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学070300 求调剂 +13 哈哈哈^_^ 2026-04-12 13/650 2026-04-12 22:57 by 想养一只帅帅的�
[考研] 材料考研调剂 +27 云木达达 2026-04-11 29/1450 2026-04-12 22:48 by kyle12138
[考研] 271求调剂 +22 2261744733 2026-04-11 22/1100 2026-04-12 22:13 by fqwang
[考研] 本科南方医科大学 一志愿985 药学学硕284分 求调剂 +5 弱水听文 2026-04-09 5/250 2026-04-12 13:16 by shengxi123
[考研] 求助调剂，跨调 +12 X十甫寸Y 2026-04-11 12/600 2026-04-12 10:20 by zhouyuwinner
[考研] 化学工程调剂289 +44 yang婷 2026-04-07 50/2500 2026-04-12 02:36 by 秋豆菜芽
[考研] 303求调剂 +14 SereinQ 2026-04-10 15/750 2026-04-11 20:43 by 蓝云思雨
[考研] 085404 293求调剂 +9 勇远库爱314 2026-04-06 10/500 2026-04-11 10:36 by 紫曦紫棋
[考研] 311求调剂 +13 xyp想读书 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:41 by 猪会飞
[考研] 342电子信息专硕求调剂 +9 你让我怎么荔枝 2026-04-10 10/500 2026-04-11 08:33 by zhq0425
[考研] 284求调剂 +9 让我上岸吧阿西 2026-04-09 11/550 2026-04-10 19:18 by 靖jing
[考研] 314求调剂 +23 wakeluofu 2026-04-09 24/1200 2026-04-10 15:31 by MOF_Catal
[基金申请] 有爆料，一个青年教师卖房得400万，然后换了一个四青帽子 +9 babu2015 2026-04-08 9/450 2026-04-10 11:43 by 苏东坡二世
[考研] 270求调剂 +3 031127 2026-04-06 4/200 2026-04-08 21:00 by 逆水乘风
[考研] 一志愿南京航空航天大学 材料与化工329分求调剂 +11 Mr. Z 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:15 by luoyongfeng
[考研] 287求调剂 +6 Fnhc 2026-04-07 6/300 2026-04-08 10:05 by xingguangj
[考研] 331求调剂 +5 张元一 2026-04-07 6/300 2026-04-07 22:13 by hemengdong
[考研] 0854求调剂 +9 亨氏番茄沙司 2026-04-06 10/500 2026-04-07 14:37 by shdgaomin
[考研] 081200-11408-367学硕求调剂 +4 1_2_3111 2026-04-06 4/200 2026-04-07 08:13 by jp9609
[考研] 285求调剂 +5 mapmath 2026-04-06 6/300 2026-04-06 17:18 by 蓝云思雨
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭