| 查看: 2541 | 回复: 5 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
求问一个问题，dNTP浓度过低是否在PCR反应中就会形成引物二聚体 谢谢
|
|||
谢谢大家哦 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有105人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大家做pcr的酶引物 模板从冰箱里拿出来是怎么融化的啊
已经有20人回复
- mitsunobu反应求助
已经有26人回复
- 6%变性聚丙酰胺凝胶电泳SSR引物筛选
已经有13人回复
- 同样条件下的，对照菌株比样品菌株的PCR目标条带亮很多
已经有4人回复
- PCR条带为什么会出现引物二聚体呀？目的条带没有出现。新手不大懂~~~
已经有9人回复
- 【求助/交流】有引物二聚体、非特异性扩增带是怎么回事？
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR引物二聚体问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】溶解曲线法及电泳法检查引物二聚体的差异
已经有13人回复
- 【分享】PCR产物中减少引物二聚体的方法
已经有33人回复
tupac225
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 103 (高中生)
- 金币: 1967.9
- 散金: 20
- 红花: 4
- 帖子: 460
- 在线: 175.3小时
- 虫号: 1533370
- 注册: 2011-12-11
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 真是热心的虫虫啊 2012-07-18 13:55:35
cuiwen_tao: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-07-18 15:28:02
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 真是热心的虫虫啊 2012-07-18 13:55:35
cuiwen_tao: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-07-18 15:28:02
|
怎样减少减少引物二聚体？ 参考见解： 1. 从引物自身着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法； 2. 可能模板有问题； 3. 模板浓度过小，适当加大模板量； 4. Taq酶，引物，Mg2+浓度可能过高，可降低它们的浓度； 5. 取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引物二聚体就会消失的； 6. 所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO，可以增强特异性； 7. PCR反应体系的配制在冰上进行，最后加TAq酶，PCR结束后，产物勿放置在室温下过长时间，有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体。 8. 增加循环数； 9. 降低退火温度后有条带，则应逐渐提高温度，若提高温度的同时产物量减少，则考虑增加镁离子浓度（根据扩增片断长度而定，片段长则相应镁离子浓度应该高一些）； 10. 若降低退火温度，发现还是只有引物二聚体，而且镁离子的浓度在 20-25mmol/l没有区别，则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀，导致吸取的试剂浓度不对。 11. 以上次的pcr产物作模板二次pcr，可以提高引物与模板的特异性，减少引物二聚体，如果两次时间间隔短的话，可以把原产物稀释100－1000倍，如果间隔较长可以稀释50－100倍。 影响平台效应的因素有哪些？ 参考见解： 1、 反应试剂（dNTP或酶）稳定性的改变； 2、 终产物（如焦磷酸）的抑制效应； 3、 产物浓度超过10-5时可产生重复退火，于是会降低引物延伸速率或DNA聚合酶的活性。 4、 高浓度产物DNA双链的解链不宝剑。平台效应时的一种重要后果是由于错误引导，在开始时浓度不高的非特异产物会继续扩增，使结果的分析复杂化。 |
3楼2012-07-18 12:02:11
2楼2012-07-18 11:21:25
4楼2012-07-18 16:00:55
yuguiyan
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 277 (大学生)
- 金币: 15912.3
- 散金: 451
- 红花: 78
- 沙发: 433
- 帖子: 21986
- 在线: 2078.9小时
- 虫号: 2029722
- 注册: 2012-09-25
- 专业: 原子和分子物理
5楼2012-11-28 19:43:38
