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chendarid0银虫 (初入文坛)
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【求助/交流】关于荧光定量PCR中cdna合成的问题 已有7人参与
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各位高手请指点啊 ，小弟在此谢过了 我是做荧光定量pcr的 在其上游步骤cdna合成中 我用primescript 1st strand cdna synthesis kit 时得到的cdna用内参引物β-actin进行半定量pcr鉴定结果发现目的条带比较淡，但无其他杂带。但是我用他们公司推荐的专门用于荧光定量pcr的可以去除基因组dna污染的试剂盒primescript RT reagent kit with gDNA eraser时可以得到目的条带比较亮，但是却有小于100bp的引物二聚体，呈弥散雾状分布在下方，听师姐说cdna合成后是需要基因组dna的去除的，请问各位高手这是怎么回事 谢谢 |
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7楼2010-11-04 11:19:06
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我有这试剂盒 但有问题
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我有这种可以去除基因组DNA的primerscript RT reagent kit with gDNA eraser(perfect real time)的专门为荧光定量的试剂盒，可是得到的CDNA进行以内参基因β-actin为引物pcr扩增时出现非特异性扩增。以前用那种不含基因组DNA去除的普通试剂盒primerscript 1st strand cdna synthesis kit 时反而没有非特异性扩增，这是怎么回事呢？ 我是想用去除基因组DNA的primerscript RT reagent kit with gDNA eraser(perfect real time)的专门为荧光定量的试剂盒，怎样才能避免非特异性扩增呢？ 非特异性扩增一般在目的条带下面呈雾状团簇状分布，有点像云朵，也有小于100bp的引物二聚体。 请各位高手指点一二，小弟不胜感激! |
8楼2010-11-05 09:51:02
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