24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

chendarid0

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 424.5
散金: 5
帖子: 50
在线: 32.4小时
虫号: 1057694
注册: 2010-07-14
性别: GG
专业: 生物化学

[交流] 【求助/交流】关于荧光定量PCR中cdna合成的问题已有7人参与

各位高手请指点啊，小弟在此谢过了
我是做荧光定量pcr的在其上游步骤cdna合成中我用primescript 1st strand cdna synthesis kit 时得到的cdna用内参引物β-actin进行半定量pcr鉴定结果发现目的条带比较淡，但无其他杂带。但是我用他们公司推荐的专门用于荧光定量pcr的可以去除基因组dna污染的试剂盒primescript RT reagent kit with gDNA eraser时可以得到目的条带比较亮，但是却有小于100bp的引物二聚体，呈弥散雾状分布在下方，听师姐说cdna合成后是需要基因组dna的去除的，请问各位高手这是怎么回事
谢谢

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有243人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？已经有12人回复
小白请问，cDNA第一条链合成后如何做PCR了？已经有5人回复
反转录已经有16人回复
想问下在以cDNA为模板时，PCR的结果却是徒步什么原因已经有5人回复
【求助/交流】qRT-PCR疑问已经有5人回复
【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答已经有12人回复
【专题】PCR实验技术指南已经有535人回复
RT-PCR后的cDNA呢？已经有17人回复

三人行必有我师

1楼2010-10-30 15:17:32

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

chendarid0

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 424.5
散金: 5
帖子: 50
在线: 32.4小时
虫号: 1057694
注册: 2010-07-14
性别: GG
专业: 生物化学

我有这试剂盒但有问题

引用回帖:

Originally posted by tsq0126 at 2010-11-04 09:38:06:
那可以在反转录之前用DNA酶消化一下，或者现在TAKARA公司也有专门的反转录试剂盒，本身就含有DNA酶，反转录的同时也把基因组DNA消化啦，很简单的，一起才以前一千钱左右。

我有这种可以去除基因组DNA的primerscript RT reagent kit with gDNA eraser(perfect real time)的专门为荧光定量的试剂盒，可是得到的CDNA进行以内参基因β-actin为引物pcr扩增时出现非特异性扩增。以前用那种不含基因组DNA去除的普通试剂盒primerscript 1st strand cdna synthesis kit 时反而没有非特异性扩增，这是怎么回事呢？我是想用去除基因组DNA的primerscript RT reagent kit with gDNA eraser(perfect real time)的专门为荧光定量的试剂盒，怎样才能避免非特异性扩增呢？
非特异性扩增一般在目的条带下面呈雾状团簇状分布，有点像云朵，也有小于100bp的引物二聚体。
请各位高手指点一二，小弟不胜感激!