应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于荧光定量PCR中cdna合成的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2973  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

chendarid0

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于荧光定量PCR中cdna合成的问题 已有7人参与

各位高手请指点啊 ，小弟在此谢过了
我是做荧光定量pcr的 在其上游步骤cdna合成中 我用primescript 1st strand cdna synthesis kit 时得到的cdna用内参引物β-actin进行半定量pcr鉴定结果发现目的条带比较淡，但无其他杂带。但是我用他们公司推荐的专门用于荧光定量pcr的可以去除基因组dna污染的试剂盒primescript RT reagent kit with gDNA eraser时可以得到目的条带比较亮，但是却有小于100bp的引物二聚体，呈弥散雾状分布在下方，听师姐说cdna合成后是需要基因组dna的去除的，请问各位高手这是怎么回事
谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
三人行必有我师
1楼 2010-10-30 15:17:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chendarid0

银虫 (初入文坛)

我有这试剂盒 但有问题

引用回帖:
Originally posted by tsq0126 at 2010-11-04 09:38:06:
那可以在反转录之前用DNA酶消化一下，或者现在TAKARA公司也有专门的反转录试剂盒，本身就含有DNA酶，反转录的同时也把基因组DNA消化啦，很简单的，一起才以前一千钱左右。

我有这种可以去除基因组DNA的primerscript RT reagent kit with gDNA eraser(perfect real time)的专门为荧光定量的试剂盒，可是得到的CDNA进行以内参基因β-actin为引物pcr扩增时出现非特异性扩增。以前用那种不含基因组DNA去除的普通试剂盒primerscript 1st strand cdna synthesis kit 时反而没有非特异性扩增，这是怎么回事呢？ 我是想用去除基因组DNA的primerscript RT reagent kit with gDNA eraser(perfect real time)的专门为荧光定量的试剂盒，怎样才能避免非特异性扩增呢？
非特异性扩增一般在目的条带下面呈雾状团簇状分布，有点像云朵，也有小于100bp的引物二聚体。
请各位高手指点一二，小弟不胜感激!
赞一下 回复此楼
三人行必有我师
8楼2010-11-05 09:51:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

chendarid0

银虫 (初入文坛)

请高手回复啊 ，不然我这帖子就石沉大海了啊

请高手指点啊 不然我这帖子就石沉大海了啊
赞一下 回复此楼
三人行必有我师
2楼2010-11-02 08:59:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taigongzaici

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
听师姐说cdna合成后是需要基因组dna的去除的
那是必须的
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-11-02 09:36:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有基因组存在，定量就不准了
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-11-02 12:36:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +6 芋泥小铃铛 2026-03-28 6/300 2026-03-28 14:15 by Ainin_
[考研] 329求调剂 +6 星野? 2026-03-26 6/300 2026-03-28 14:14 by 唐沐儿
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +8 辰沐5211314 2026-03-26 8/400 2026-03-28 11:25 by xuxiang
[考研] 085602 307分 求调剂 +7 不知道叫什么！ 2026-03-26 7/350 2026-03-28 09:57 by 神马都不懂
[考研] 286求调剂 +4 丢掉懒惰 2026-03-27 7/350 2026-03-28 08:07 by baoball
[考研] 322求调剂 +6 宋明欣 2026-03-27 6/300 2026-03-28 07:08 by wangy0907
[考研] 295求调剂 +5 1428151015 2026-03-27 6/300 2026-03-28 04:04 by fmesaito
[考研] 求调剂 +8 张zz111 2026-03-27 9/450 2026-03-28 03:41 by fmesaito
[考研] 0703化学338求调剂！ +6 Zuhui0306 2026-03-26 7/350 2026-03-27 10:35 by shangxh
[考研] 349求调剂 +4 李木子啊哈哈 2026-03-25 4/200 2026-03-26 22:49 by fmesaito
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 297求调剂 +6 田洪有 2026-03-26 6/300 2026-03-26 15:55 by 不吃魚的貓
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] B区考研调剂 +4 yqdszhdap－ 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:51 by baoball
[考研] 求调剂 +6 研研，接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭