应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请大家帮忙看看引物二聚体的问题
61/1返回列表
查看: 1726  |  回复: 5
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者cdmmore将赠送您 5 个金币

cdmmore

铜虫 (小有名气)

[求助] 请大家帮忙看看引物二聚体的问题

下面这张图最右边两个条带是阳性对照，几乎看不到引物二聚体，其余11个是菌落PCR，有大量引物二聚体，并且点样孔也比较亮，请问各位大侠这是什么原因呢？
体系都是一样的，仅模板不同。当时加的单菌落的量比较大，PCR反应液都有点浑浊了，阳性对照模板是菌液，PCR反应液清澈的。大量的引物二聚体是不是和模板量有关系呢？
先谢谢大家啦！

1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-01-03 22:48:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cdmmore: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 非常感谢 2013-01-04 10:37:53
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-01-07 17:01:56
模板量不合适会影响PCR的特异性和扩增效率，如果特异性扩增减少时，引物二聚体的现象就更加严重。所以你的这个现象算是正常。至于点样孔亮的问题也很简单，就是模板中的DNA和蛋白形成复合物，就会跑不下来。这对菌落PCR很难避免的。你后面两个样品估计菌液控制的量比较合适，所以没有明显的引物二聚体，点样孔也比较干净。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-01-04 08:05:46
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdmmore

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-04 08:05:46
模板量不合适会影响PCR的特异性和扩增效率，如果特异性扩增减少时，引物二聚体的现象就更加严重。所以你的这个现象算是正常。至于点样孔亮的问题也很简单，就是模板中的DNA和蛋白形成复合物，就会跑不下来。这对菌落 ...

谢谢谢谢，可是看图上引物二聚体现象严重的扩出来的条带亮度和几乎没有引物二聚体的差不多呢，说明它的特异性扩增也不算少呀？
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-04 10:37:35
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by cdmmore at 2013-01-04 10:37:35
谢谢谢谢，可是看图上引物二聚体现象严重的扩出来的条带亮度和几乎没有引物二聚体的差不多呢，说明它的特异性扩增也不算少呀？...

虽然有些泳道看起来是这样。不知道你是否严格控制了上样量。总体上说，特异条带亮的样品引物二聚体要少一些。
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-04 10:59:33
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

txw87

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cdmmore: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-04 13:56:08
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-07 17:02:06
引物二聚体一般长度比较固定，且稳定出现，你这个一会有一会没有，应该不是引物二聚体，而是你模板加的太多了出现了非特异性扩增（与模板其他位置互补），这样才好解释为啥是弥散的条带。

PCR模板一般是加少不加多（当然少也要保证量足够），要给引物和酶重复的反应空间嘛，不然你模板那么多，都没地方反应了
赞一下 回复此楼
5楼2013-01-04 13:02:44
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdmmore

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by txw87 at 2013-01-04 13:02:44
引物二聚体一般长度比较固定，且稳定出现，你这个一会有一会没有，应该不是引物二聚体，而是你模板加的太多了出现了非特异性扩增（与模板其他位置互补），这样才好解释为啥是弥散的条带。

PCR模板一般是加少不加 ...

谢谢，有一定道理
回复此楼
6楼2013-01-07 16:31:43
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cdmmore 的主题更新
61/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 小论文影响大论文查重吗？ +4 阿道夫深度 2024-11-14 5/250 2024-11-16 14:20 by lx7991
[考博] 联系的博导说有时间聊一聊 我回复了自己可以的时间后 博导就没再回复 +6 evan0489 2024-11-15 6/300 2024-11-16 14:18 by lx7991
[教师之家] 我感觉当老师好累啊。。 +19 fairy1122 2024-11-15 20/1000 2024-11-16 14:16 by lx7991
[第一性原理] 有没有要一起买VASP版权的，可以6个人 5+3 变成小神 2024-11-14 9/450 2024-11-16 13:33 by dxcharlary
[硕博家园] 硕博人来此 +4 ColonMo 2024-11-16 5/250 2024-11-16 13:14 by utahh
[硕博家园] 和导师撕破脸了 +18 圆满123456 2024-11-13 22/1100 2024-11-16 09:49 by zyhou
[论文投稿] chemical science和advanced science哪个好一点 +6 yly150 2024-11-12 6/300 2024-11-15 21:06 by hcj9909053
[考博] 随缘读博 一篇中科院一区Top 一篇中科院二区Top 两篇专利 +6 Ricoch4t 2024-11-13 15/750 2024-11-15 19:24 by 青青之洲
[教师之家] 大学老师 +11 考研一路顺风 2024-11-13 14/700 2024-11-15 15:24 by LNP@mRNA
[基金申请] 变性人申请基金咋算性别？ +21 leicahfs 2024-11-11 21/1050 2024-11-15 14:54 by 跳鱼拨刺
[基金申请] 去年七月底入站的还能申请下一批吗？ +4 brightwo 2024-11-14 4/200 2024-11-15 14:18 by gazi1111
[基金申请] 求助 +4 Enenenene 2024-11-15 4/200 2024-11-15 09:36 by 榨菜拌青椒
[基金申请] 博后基金分组排名 +7 攻城2025 2024-11-14 7/350 2024-11-14 21:19 by 实验小白ha
[论文投稿] OE返修遇到expired +3 隔壁老王来了 2024-11-14 7/350 2024-11-14 20:46 by 隔壁老王来了
[有机交流] 同一个反应回流情况不同 20+3 1853846 2024-11-12 3/150 2024-11-14 15:42 by 太阳谷
[基金申请] 76批博后基金 +3 feiyi3986 2024-11-14 3/150 2024-11-14 11:50 by puly
[论文投稿] 求JACS和ACIE的最新文章模板 10+4 Jane060390 2024-11-10 4/200 2024-11-13 09:13 by 北京莱茵润色
[基金申请] 浙江省青基怎么看A还是B？ +8 ToallGoof 2024-11-11 14/700 2024-11-13 09:11 by Praybest
[论文投稿] 论文接受后，编辑部发邮件提醒缺少附件 15+4 上善若水明泪 2024-11-10 4/200 2024-11-12 14:24 by 北京莱茵润色
[论文投稿] 爱思唯尔投稿系统里的通讯作者可以和文章里的通讯作者标注不同吗 +7 Omnissiah 2024-11-10 7/350 2024-11-12 14:07 by holypower
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭