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帮忙看下这两个引物有没有问题
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正向引物 5-3：CCGAATTCATGAAAAAGATTTGGCTGGCGCTGGCTGG Tm=71.74° GC含量为51% 反向引物 5-3：GTAATCAAGCTTAATGATGATGATGATGATGTAGAAAACTTTGTATCCACTCTGTGAACCTTGGCACC Tm=73.94° GC含量为38% 哪位大侠帮忙看看这两个引物有没有问题啊，这是我重叠延伸PCR中第二轮PCR的上下游引物，第一轮PCR的A,B片段都P出来了，但是第二轮就是P不出来，退火温度尝试了50°，55°，以及touch down都P不出来，核酸电泳时都在100bp及250bp有很亮的条带。 |
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