应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 帮忙看下这两个引物有没有问题
81/1返回列表
查看: 1323  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

飘零的叶子

新虫 (小有名气)

[求助] 帮忙看下这两个引物有没有问题

正向引物 5-3：CCGAATTCATGAAAAAGATTTGGCTGGCGCTGGCTGG
Tm=71.74°    GC含量为51%
反向引物 5-3：GTAATCAAGCTTAATGATGATGATGATGATGTAGAAAACTTTGTATCCACTCTGTGAACCTTGGCACC
Tm=73.94°     GC含量为38%
哪位大侠帮忙看看这两个引物有没有问题啊，这是我重叠延伸PCR中第二轮PCR的上下游引物，第一轮PCR的A,B片段都P出来了，但是第二轮就是P不出来，退火温度尝试了50°，55°，以及touch down都P不出来，核酸电泳时都在100bp及250bp有很亮的条带。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-20 19:17:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sd3824289

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-24 14:22:03
你可以适当减少引物的量，一般PCR体系中引物的用量为0.5μL，浓度为10MM，我开始做重叠延伸PCR的时候就是用温度梯度来筛选退火温度的！祝你好运！
赞一下 回复此楼
坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
2楼2012-07-24 10:47:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生物大虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

反向引物有潜在发夹结构，有可能是这个原因吧，100bp左右是引物二聚体吧
赞一下 回复此楼
谋事在人成事在天
3楼2012-07-24 11:51:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sd3824289 at 2012-07-24 10:47:58
你可以适当减少引物的量，一般PCR体系中引物的用量为0.5μL，浓度为10MM，我开始做重叠延伸PCR的时候就是用温度梯度来筛选退火温度的！祝你好运！

我们一般是加2ul的引物，我们用touch down做了，没结果
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-24 14:08:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

polepolar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一个原因可能是反向引物太长了，另一个原因可能跟片断A，B的重叠区序列有关，你可以分析一下重叠区是否有二级结构。
赞一下 回复此楼
北京普尔普乐生物技术有限公司(www.polepolar.com)
5楼2012-07-24 15:24:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sd3824289

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引物用0.5μL就够了，引物多了反而会导致PCR效果不好！
赞一下 回复此楼
坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
6楼2012-07-26 16:28:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sd3824289

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

想问一下楼主，你的PCR体系是多少的？
赞一下 回复此楼
坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
7楼2012-07-26 16:39:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sd3824289 at 2012-07-26 16:39:34
想问一下楼主，你的PCR体系是多少的？

50ul的
回复此楼
8楼2012-07-26 21:34:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 飘零的叶子 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖？ +4 CrisMessi 2026-08-18 4/200 2026-08-19 00:53 by gatelove
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 27/1350 2026-08-18 21:44 by Noways
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +3 瞬息宇宙 2026-08-15 3/150 2026-08-18 21:40 by xiaohuixin
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 9/450 2026-08-18 20:09 by 奶牛小黑
[基金申请] 朋友圈看到的 +4 wangzilk 2026-08-18 5/250 2026-08-18 19:25 by wangzilk
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +51 医学老男孩 2026-08-13 110/5500 2026-08-18 19:07 by icerianxia
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +9 yuleib84 2026-08-18 10/500 2026-08-18 16:52 by archvillain
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭