应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请帮忙看看我用primer5设计的引物是否有问题？？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 2406  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

l20065091

新虫 (初入文坛)

[求助] 请帮忙看看我用primer5设计的引物是否有问题？？

用primer5设计出的一对引物如下图，送去引物公司合成后pcr扩增结果失败没有条带产生，只有二聚体，请问这是什么原因？是引物设计的问题还是其他什么问题，序列来自GENEBANK！！
这是反向引物



正向引物
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : GU071214.1.txt
    • 2012-07-01 09:24:10, 430 bytes

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

something useful

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-01 09:25:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引物设计我认为是没问题的，万一是合成有问题或者后来降解了，那就很难说了。PCR扩增无产物的原因实在太多了，不一一说了。如果不是上面的原因，那么就慢慢检查吧，首先保证模板ok，然后试剂ok。设置好各种对照，争取一次PCR多分析几个因素吧。
赞一下(3人) 回复此楼
5楼2012-07-02 05:27:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+5, 西瓜斑斑辛苦 2012-07-02 13:45:06
引物应该是没问题的。
你的产物才160bp，跟引物二聚体的位置会很接近，可能有条带但是你没看出来。建议你再做一次PCR，加个无模板的空白对照，两个产物放胶上一跑就很容易看了！
另外，由于产物很小，所以跑胶时间太长，产物跑到胶外去了也是很有可能的！
最后，无图无真相，楼主还是把电泳图也贴上来吧
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2012-07-02 05:22:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-02 13:44:43
1：楼主最好把你要P的目的基因全长片段贴出来，这样有利于分析.
2：影响扩增的因素很多，比如酶，模板，PCR体系，PCR条件，楼主最好把这些也贴一下，这样综合考虑才能知道到底是哪出问题了.
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-07-01 22:22:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

第五平原

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
也有可能是你的扩增体系有问题，比如你调整一下退火温度试试。
赞一下 回复此楼
勤勉
3楼2012-07-01 22:34:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaikal

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-04 13:47:31
真心觉得引物没什么问题，如果你信不过的话把后引物的GC含量在提高一点，然后去BLAST一下，看看这两个引物是不是在测定的基因上
假如都没问题的话，我建议楼主改变一下实验反应条件！祝楼主实验顺利！
赞一下 回复此楼
加油！！！
6楼2012-07-02 14:21:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

流氓有文化

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的产物太小了，建议你用2.0的胶，大板跑
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-02 17:40:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l20065091

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-07-01 22:22:17
1：楼主最好把你要P的目的基因全长片段贴出来，这样有利于分析.
2：影响扩增的因素很多，比如酶，模板，PCR体系，PCR条件，楼主最好把这些也贴一下，这样综合考虑才能知道到底是哪出问题了.

目的基因片段我附在了附件里面咯，附件里的TXT文件就是我所设计引物的目的基因，是SSR相关的序列。
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-04 10:04:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l20065091

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 第五平原 at 2012-07-01 22:34:57
也有可能是你的扩增体系有问题，比如你调整一下退火温度试试。

我做PCR都先用的温度梯度扩增的，什么也没出来！！
赞一下 回复此楼
9楼2012-07-04 10:04:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l20065091

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-07-02 05:22:53
引物应该是没问题的。
你的产物才160bp，跟引物二聚体的位置会很接近，可能有条带但是你没看出来。建议你再做一次PCR，加个无模板的空白对照，两个产物放胶上一跑就很容易看了！
另外，由于产物很小，所以跑胶时间 ...

空白对照每次都做的，补上电泳图片！！
赞一下 回复此楼
10楼2012-07-04 10:05:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 l20065091 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 295求调剂 +7 FZAC123 2026-04-03 7/350 2026-04-05 15:42 by wwytracy
[考研] 生物与医药调剂 +3 十七sa 2026-04-05 3/150 2026-04-05 13:28 by jp9609
[考研] 085602调剂 初试总分335 +7 19123253302 2026-04-05 7/350 2026-04-05 13:26 by lbsjt
[考研] 318求调剂 +11 ykyhsa 2026-04-05 13/650 2026-04-05 12:44 by aidndnjck
[考研] 男生，一志愿沪9生物学071000，初试308求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-04 3/150 2026-04-05 08:26 by barlinike
[考研] 302分求调剂 一志愿安徽大学085601 +5 zyx上岸！ 2026-04-04 5/250 2026-04-05 07:50 by 544594351
[考研] 288环境专硕,求调材料方向 +13 lllllos 2026-04-04 14/700 2026-04-04 23:34 by lqwchd
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-04-02 13/650 2026-04-04 23:10 by 无际的草原
[考研] 能动调剂326专硕 +4 wan112233 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:47 by yu221
[考研] 材料调剂 +10 懒羊羊轻置玉臀 2026-04-02 11/550 2026-04-04 21:56 by laoshidan
[考研] 085601，一志愿厦大334复试被刷求调剂 +13 曾仰之 2026-04-03 15/750 2026-04-04 20:13 by dongzh2009
[考研] 一志愿南农090401，268，求调剂 +5 一木鸟然 2026-04-04 5/250 2026-04-04 17:07 by babysonlkd
[考研] 考研调剂 +4 zybz冲冲冲 2026-04-03 6/300 2026-04-04 13:08 by zybz冲冲冲
[考研] 400分求调剂 +3 尴尬且挠头 2026-04-04 3/150 2026-04-04 08:41 by jp9609
[考研] 学硕288调剂!!! +3 小王xw123 2026-04-03 3/150 2026-04-03 21:20 by 啵啵啵0119
[考研] 310求调剂 +18 争取九点睡 2026-03-30 18/900 2026-04-03 18:35 by ls刘帅
[考研] 生物学硕341求调剂 +4 你笑起来像云朵 2026-04-03 4/200 2026-04-03 10:32 by macy2011
[考研] 302求调剂一志愿北航070300，本科郑大化学 +8 圣日耳曼条 2026-04-01 11/550 2026-04-02 07:40 by chemdavid
[考研] 379求调剂 +3 ?苦瓜不苦 2026-04-01 3/150 2026-04-01 20:09 by 暮云清寒
[考研] 080200学硕，机械工程专业277分，求带走！ +4 瓶子PZ 2026-03-31 4/200 2026-03-31 20:16 by vgtyfty
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭