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l20065091

新虫 (初入文坛)

[求助] 请帮忙看看我用primer5设计的引物是否有问题??

用primer5设计出的一对引物如下图,送去引物公司合成后pcr扩增结果失败没有条带产生,只有二聚体,请问这是什么原因?是引物设计的问题还是其他什么问题,序列来自GENEBANK!!
这是反向引物



正向引物
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l20065091

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 第五平原 at 2012-07-01 22:34:57
也有可能是你的扩增体系有问题,比如你调整一下退火温度试试。

我做PCR都先用的温度梯度扩增的,什么也没出来!!
9楼2012-07-04 10:04:42
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查看全部 13 个回答

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-02 13:44:43
1:楼主最好把你要P的目的基因全长片段贴出来,这样有利于分析.
2:影响扩增的因素很多,比如酶,模板,PCR体系,PCR条件,楼主最好把这些也贴一下,这样综合考虑才能知道到底是哪出问题了.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-07-01 22:22:17
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第五平原

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
也有可能是你的扩增体系有问题,比如你调整一下退火温度试试。
勤勉
3楼2012-07-01 22:34:57
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+5, 西瓜斑斑辛苦 2012-07-02 13:45:06
引物应该是没问题的。
你的产物才160bp,跟引物二聚体的位置会很接近,可能有条带但是你没看出来。建议你再做一次PCR,加个无模板的空白对照,两个产物放胶上一跑就很容易看了!
另外,由于产物很小,所以跑胶时间太长,产物跑到胶外去了也是很有可能的!
最后,无图无真相,楼主还是把电泳图也贴上来吧
4楼2012-07-02 05:22:53
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