应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请帮忙看看我用primer5设计的引物是否有问题？？
51/1返回列表
查看: 2207  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

l20065091

新虫 (初入文坛)

[求助] 请帮忙看看我用primer5设计的引物是否有问题？？

用primer5设计出的一对引物如下图，送去引物公司合成后pcr扩增结果失败没有条带产生，只有二聚体，请问这是什么原因？是引物设计的问题还是其他什么问题，序列来自GENEBANK！！
这是反向引物



正向引物
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : GU071214.1.txt
    • 2012-07-01 09:24:10, 430 bytes

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

something useful

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-01 09:25:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

第五平原

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
也有可能是你的扩增体系有问题，比如你调整一下退火温度试试。
赞一下 回复此楼
勤勉
3楼2012-07-01 22:34:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-02 13:44:43
1：楼主最好把你要P的目的基因全长片段贴出来，这样有利于分析.
2：影响扩增的因素很多，比如酶，模板，PCR体系，PCR条件，楼主最好把这些也贴一下，这样综合考虑才能知道到底是哪出问题了.
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-07-01 22:22:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+5, 西瓜斑斑辛苦 2012-07-02 13:45:06
引物应该是没问题的。
你的产物才160bp，跟引物二聚体的位置会很接近，可能有条带但是你没看出来。建议你再做一次PCR，加个无模板的空白对照，两个产物放胶上一跑就很容易看了！
另外，由于产物很小，所以跑胶时间太长，产物跑到胶外去了也是很有可能的！
最后，无图无真相，楼主还是把电泳图也贴上来吧
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2012-07-02 05:22:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引物设计我认为是没问题的，万一是合成有问题或者后来降解了，那就很难说了。PCR扩增无产物的原因实在太多了，不一一说了。如果不是上面的原因，那么就慢慢检查吧，首先保证模板ok，然后试剂ok。设置好各种对照，争取一次PCR多分析几个因素吧。
赞一下(3人) 回复此楼
5楼2012-07-02 05:27:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭