应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 设计了3条引物，请大家帮我看看是否可用，两个哪个好一些呢？谢谢了！
131/2返回列表12下一页
查看: 2581  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

襄阳蓉儿

新虫 (小有名气)

[交流] 设计了3条引物，请大家帮我看看是否可用，两个哪个好一些呢？谢谢了！ 已有9人参与

据说TM值56多的话到时候引物合成回来的TM要40多，可以用吗？
然后有错配的2对引物，错配产物都为0，影响不大把。

2.jpg



1.jpg

3.png

[ Last edited by 襄阳蓉儿 on 2012-9-22 at 17:22 ]
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

考研生涯

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
少壮不努力，长大pcr
1楼 2012-09-22 16:56:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

孙启亮

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
设计的质量都不高，建议楼主修改下错配碱基
另外，评价引物好坏的方法不是看这几张图，建议楼主用primer5 设计引物，用oligo7 评价引物，最后去NCBI进行 primer blast
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2012-09-24 22:46:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

襄阳蓉儿

新虫 (小有名气)
木有人啊…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼
少壮不努力，长大pcr
2楼2012-09-23 12:57:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

考研生涯

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-24 10:25:10
LZ并没有把问题说的太明白，对于引物设计有许多的原则问题（比如长度，GC含量，Tm值。。。），其中最重要的是Tm值，当然计算Tm值有多种方法，其中较为常用的有Tm=4×（G+C）+2×（A+T）-5，其中A,T,G,C均为引物能与模板配对的数目，结合一些原则就可以设定理想的引物，对于引物设计原则希望楼主可以去查找一下，细读揣摩。
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-23 13:26:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huxx

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-25 14:33:07
Tm, GC这些只要不是太离谱,统统都不重要,重要的是 引物序列是否与原序列完全相符, 没有错误碱基. 第一对第三对看起来不错. 还有看你的产物, 一个400bp,一个200.哪个更符合你的要求?
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-23 14:52:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

考研生涯

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by huxx at 2012-09-23 14:52:49
Tm, GC这些只要不是太离谱,统统都不重要,重要的是 引物序列是否与原序列完全相符, 没有错误碱基. 第一对第三对看起来不错. 还有看你的产物, 一个400bp,一个200.哪个更符合你的要求?

此言差矣，引物序列和原序列相符这个毋庸置疑，相信primer设计的不会有错配，那怕是自己手写也不会出错的，最为关键的是Tm，还有保证上下游引物Tm不能相差太大（3-5℃以内）。
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-24 10:32:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

trizol11

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
第三个引物是做好的，
理由：1、自由能变最小。其大于零会产生2聚体
      2、在5端有个gc碱基，比较稳定。
  其他的大家也说了。
赞一下 回复此楼
任重道远……
6楼2012-09-24 19:57:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

指上阡陌

新虫 (初入文坛)
新人飘过
回复此楼
虚心学习
8楼2012-09-24 23:40:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tnp007

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-09-24 22:46:18
设计的质量都不高，建议楼主修改下错配碱基
另外，评价引物好坏的方法不是看这几张图，建议楼主用primer5 设计引物，用oligo7 评价引物，最后去NCBI进行 primer blast

特异性很重要

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼
9楼2012-09-25 06:00:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阳光灰灰

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看起来还可以吧，去blast一下，主要是你的pcr的方法，你需要的片段长度～仅供参考～

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
10楼2012-09-25 08:26:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 襄阳蓉儿 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +11 koalala 2026-08-24 13/650 2026-08-24 10:49 by anjeeshine
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 科研孤儿太难了 +18 我4大白菜 2026-08-20 19/950 2026-08-24 09:47 by 凯恩广盛催化分�
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +11 kulium 2026-08-21 14/700 2026-08-24 02:12 by 流流伤
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭