应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请大家帮忙看看引物二聚体的问题
51/1返回列表
查看: 2330  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

cdmmore

铜虫 (小有名气)

[求助] 请大家帮忙看看引物二聚体的问题

下面这张图最右边两个条带是阳性对照，几乎看不到引物二聚体，其余11个是菌落PCR，有大量引物二聚体，并且点样孔也比较亮，请问各位大侠这是什么原因呢？
体系都是一样的，仅模板不同。当时加的单菌落的量比较大，PCR反应液都有点浑浊了，阳性对照模板是菌液，PCR反应液清澈的。大量的引物二聚体是不是和模板量有关系呢？
先谢谢大家啦！

1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-03 22:48:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

txw87

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cdmmore: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-04 13:56:08
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-07 17:02:06
引物二聚体一般长度比较固定，且稳定出现，你这个一会有一会没有，应该不是引物二聚体，而是你模板加的太多了出现了非特异性扩增（与模板其他位置互补），这样才好解释为啥是弥散的条带。

PCR模板一般是加少不加多（当然少也要保证量足够），要给引物和酶重复的反应空间嘛，不然你模板那么多，都没地方反应了
赞一下 回复此楼
5楼2013-01-04 13:02:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cdmmore: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 非常感谢 2013-01-04 10:37:53
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-01-07 17:01:56
模板量不合适会影响PCR的特异性和扩增效率，如果特异性扩增减少时，引物二聚体的现象就更加严重。所以你的这个现象算是正常。至于点样孔亮的问题也很简单，就是模板中的DNA和蛋白形成复合物，就会跑不下来。这对菌落PCR很难避免的。你后面两个样品估计菌液控制的量比较合适，所以没有明显的引物二聚体，点样孔也比较干净。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-01-04 08:05:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdmmore

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-04 08:05:46
模板量不合适会影响PCR的特异性和扩增效率，如果特异性扩增减少时，引物二聚体的现象就更加严重。所以你的这个现象算是正常。至于点样孔亮的问题也很简单，就是模板中的DNA和蛋白形成复合物，就会跑不下来。这对菌落 ...

谢谢谢谢，可是看图上引物二聚体现象严重的扩出来的条带亮度和几乎没有引物二聚体的差不多呢，说明它的特异性扩增也不算少呀？
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-04 10:37:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by cdmmore at 2013-01-04 10:37:35
谢谢谢谢，可是看图上引物二聚体现象严重的扩出来的条带亮度和几乎没有引物二聚体的差不多呢，说明它的特异性扩增也不算少呀？...

虽然有些泳道看起来是这样。不知道你是否严格控制了上样量。总体上说，特异条带亮的样品引物二聚体要少一些。
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-04 10:59:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:42 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:34 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:18 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-28 23:19 by b8fCuTHqckEt
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:45 by ez6fGg9abYaj
[有机交流] 同一个分子，一条来自文献，一条来自AI——不告诉你答案，你会选哪条？ +3 tianxiaoxian 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:44 by tianxiaoxian
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:32 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:28 by ez6fGg9abYaj
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 3/150 2026-09-28 22:21 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 17:30 by ZYXdhzDAy9ZX
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +7 zju2000 2026-09-26 8/400 2026-09-28 16:42 by beefly
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 15:32 by ZYXdhzDAy9ZX
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭